StepOnev实验建立流程StepOne实验盘设定可由StepOne.PDFVIP

StepOne v2.0 實驗建立流程.doc 1. StepOne實驗盤設定可由 StepOne Software v2.0 主畫面的Design Wizard 或 者是 Advanced Setup 將實驗方法編輯好以進行上機。 2. 如選擇 Design Wizard 來建立實驗盤時只要選擇你所需要的選項依照實驗編輯精， 靈的帶領，將實驗盤設定完成。 3. 如選擇 Advanced Setup 來進行設定: a. 在 Experiment Properties 介面先建立實驗名稱 、確認實驗機型 、選擇實 驗設計輿結果計算方式、螢光試劑的選擇、 PCR反應速度。 b. 在 Plate Setup 介面建立實驗盤中所加入的基因及樣品。 在左邊的 視窗中選擇此次實驗所要的基因及 樣品，利 用 加入新的基因 ，並編輯基因名稱及所標定的螢 光種類 並可利用其 他按鍵將之前已儲存的 Target gene 加入、儲存或刪除。樣品則可用 加入這次實驗所要上機的樣品數，並編輯樣品名稱。 在右邊的 視窗中可開始編輯樣品置放的位 置，利用滑鼠拖曳選擇 Well 並勾選右邊畫面適當的 Target gene 及 Sample 。 並可點選 來編輯 Well所要顯示的資訊如樣 品名稱、基因名稱。 1 StepOne v2.0 實驗建立流程.doc 如 欲 使 用 StepOnePlus 機 器 上 VeriFlexTM Block的 功 能 ， 請 在 視窗下，勾選 Enable VeriFlexTM Block 選項，此時 Block即被分成六個區塊。 ( 此功能僅限StepOnePlus機型) c. 在 Run Method介面編輯PCR反應條件 ，利用溫度上方工具列來增加或刪 除溫度，可在螢光被激發的溫度位置按下 確認螢光的收集步驟，選擇 下拉式選項決定收光時間在 Hold/ Ramp 。若要 使用 StepOnePlus機器上VeriFlexTM Block的功能，直接在點一下欲調整的 溫度步驟 ，選擇 並設定每個區 塊的溫度 ，請注意兩相鄰區塊溫度差異不可以超過 5度 ，第一和第六區塊最多可 差異 25度。 2 StepOne v2.0 實驗建立流程.doc d. 在 Reaction Setup 介面是協助實驗操作者將所需試劑及樣品量試算好。 在 將Primer/ Probe的起始濃度及每個反應所需 最 終 的 Primer/ Probe 濃 度 輸 入 ， 也 可 多 預 估 試 劑 混 合 的 比 例