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　实验教学教案首页 本次实验项目： 　　　　　　　　肝脏谷丙转氨酶活力测定 本次实验课时：验证性　4学时 教学要求： 1．掌握实验原理，了解转氨酶的性质及临床意义 2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 重 点：实验原理、转氨酶的转氨基作用。 教学手段及教具：课堂讲授，学生实验操作。 讲授内容及时间分配： 课堂讲授 1．相关知识……………………………………………………………　　……　 0.1 学时 2．实验目的…………………………………………………………………　　… 0.1 学时 3．实验原理……………………………………………………………………　　 0.3 学时 4．实验操作　　　　　……………………………………………………　　… 0.2 学时 实验教学 肝脏谷丙转氨酶活力测定实验的操作技术……………………………　　……　 3 学时 参考资料 《生物化学实验》 肝脏谷丙转氨酶活力测定（验证性） 相关知识 １．酶的提纯基本操作程序及基本原则 ２．酶的活力单位（IU）的定义及酶活力的测定（酶的定量测定） ３．测定酶活力一般经如下几个步骤 ①选择适宜的一定浓度的底物。 ②确定酶促反应的条件。优化条件 ③将一定量的酶液和底物溶液混合，确定反应时间（因要测定酶促反应初速度） 。 ④反应到一定时间后取出反应液终止反应。 ⑤测定产物的生成量。 ⑥计算酶活力、酶的比活力。 ４．酶的比活力－－表示酶纯度的指标 每单位酶蛋白所含的活力单位数。 对固体酶：比活力＝活力单位/mg酶蛋白 对液体酶：比活力＝活力单位/ml酶液 比活力越大，酶的活力越大，含酶量或有活性的酶量越多。 ５．总活力、纯化倍数和回收率 ６．酶活力测定方法—不同酶选用不同的方法 ７．氨基酸转氨 ８．谷丙转氨酶及临床意义: 查肝功为什么要抽血化验转氨酶指数呢？ 　丙转氨酶（ALT）和转氨酶（AST）是人体内糖和蛋白质互相转变所需的酶，人再生体内分布广泛。ALT的分布以肝中最高，主要存在于肝细胞浆中，AST存在于肝细胞浆和线粒体内。其次是肾、心、骨骼肌、脾等。AST的分布则以心肌最高，其次为肝、骨骼肌、肾脏等。 ②抽血化验若转氨酶比正常水平偏高则有可能肝组织受损破裂，肝细胞的转氨酶进入血液。（结合乙肝抗原等指标进一步确定是什么原因引起的） ③常作为疾病诊断、观察疗效和预后的指标： 　 急性肝炎：S-GPT↑↑、S-GOT↑ 心肌梗塞：S-GOT↑↑ 一、实验目的 １．了解转氨酶的性质及临床意义 ２．掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 二、实验原理 联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。丙氨酸及α－酮戊二酸为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性（肝细胞已有的）磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm，可用于测定丙酮酸的含量。α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm波长比色时，丙酮酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。 谷丙转氨酶（简称GPT、ALT正常值是40U/L以内 CH3 CH3 丙酮酸 GTP 丙氨酸