第4章节 吸附层析.ppt

一、基本概念和色谱过程 1、概念 色谱法(Chromatography），也称色层法或层析法。此种方法基于混合液中各组分的分子极性、分子大小与形状、吸附力、亲和力等物理化学性质的差异，导致各组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，组分在两相间进行连续多次分配，从而彼此分离。 色谱不只是分离技术，也是一种分析方法。 2、按固定相的形态分类 （1）柱层析 (column chromatography) 固定相装在柱内即为层析柱，根据层析柱的尺寸，结构和制备方法不同，分为填充柱层析和毛细管或开管柱层析。 （2）平板层析(planar chromatography) 固定相呈平板状，包括薄层层析、薄膜层析和纸层析。固定相以均匀薄层涂敷在玻璃板、塑料板或有机薄膜上，或将固定相直接制成薄板状，称为薄层层析(TLC)；用滤纸作为固定相或固定相载体的层析为纸层析(PC)。 3、按分离过程物理化学原理分类 （1）吸附层析 (absorption chromatography) 用固体吸附剂作层析的固定相，利用样品各组分在吸附剂上吸附力的大小不同，而将各组分分离。如气－固吸附层析和液－固吸附层析。 （2）分配层析 (partition chromatography) 用液体作固定相，样品组分（溶质）在固定相中溶解、吸附或吸着能力不同，因而在两相之间分配系数不同将样品组分分离。如气－液分配层析，液－液分配层析。在液－液分配层析中，根据流动相和固定相对极性不同，又分为正相层析和反相层析。 （3）离子交换层析 ion-exchange chromatography （4）凝胶层析 gel chromatography （5）亲和层析 affinity chromatography 一、常用术语 1. 固定相：层析基质 2. 流动相：洗脱剂、展层剂 3. 层析：样品在固定相和流动相中连续多次进行分配、吸附或交换作用，最终使各组分得到分离。 4. 操作容量：在特定条件下，某种成分与基质反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量。一般以每克基质结合某种成分的mmol数或mg数表示。 2、常用吸附剂的特点 羟基磷灰石：性质稳定、吸附容量大、适用范围广 硅胶：化学惰性、吸附容量大、活性程度与其含水量关系密切（含水量高，活性小） 极性强的吸附剂易吸附极性强的物质，非极性的吸附剂易吸附非极性的物质。为便于解吸附，在分离极性大的物质时应选择极性小的吸附剂。 2、选择洗脱剂的原则 ①性质稳定：不改变吸附剂的性质，如溶胀或收缩 ②纯度高：防止流动相中的杂质在吸附柱上积累形 成的污染 ③能较完全洗脱下所分离的成分 ④低粘度：高粘度时降低溶质扩散、增加柱压，降 低效率 ⑤样品容易回收 ⑥无吸收背景：提高检测的灵敏度 五、层析柱及装填技术 1、层析柱 吸附层析柱一般 d:h ≈ 1:10－1:40 2、吸附剂用量 为分离样品的 30 ～ 50 倍 3、柱子的装填 干装与湿装 六、层析样品的要求 样品的溶解度好 加入的样品量利于提高分辨率 加样量≤ Vt— Vt。 样品的浓度与粘度的考虑 七、洗脱 1、原理 溶解（解吸附），吸附，再溶解，再吸附，被吸附的物质解吸并随洗脱剂向前移动，又吸附到新的吸附剂上，再被洗脱剂解吸，如此反复，各组分吸附能力及溶解能力的差别导致移动距离的差异，使各种成份形成各自的区带，样品得以分离及纯化。若分离物是有色的，便看见色谱层。 一、原理： 将吸附剂在玻璃或涤纶胶片片基上均匀涂布成薄膜或薄板，经过活化后，即可对样品进行展层，达到分离、纯化、制备、分析鉴定的目的。 二、优点： 1、展层时间短 2、设备简单、操作方便 3、干扰因素小 4、显色方便 5、灵敏度高 硅胶薄层薄板的活性测定 苏丹黄、苏丹红、靛酚蓝在活化的薄层薄板上的层析行为 6、操作程序 一、基本