基因工程萧山三中.ppt

基因工程 * * （一）基因工程的概念 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 实质 基因重组 基因工程培育抗虫棉的简要过程： （一）基因工程的概念 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 普通棉花细胞(不含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 棉花细胞(含抗虫基因) 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ （二）基因操作的工具 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 基因的剪刀——限制性内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） （二）基因操作的工具 存在： 特点： 作用： 主要存在于微生物中 每种酶只能识别一种特定的核苷酸序列； 各种酶的切点不同，即具有特定的酶切位点 即具有特异性（专一性） 在特定的切点上切割DNA分子，形成两个完全相同的黏性末端 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） （二）基因操作的工具 限制酶 黏性末端 黏性末端 EcoRI 什么叫黏性末端？ （二）基因操作的工具 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 基因的针线——DNA连接酶 （二）基因操作的工具 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？ （二）基因操作的工具 导入过程需要运输工具——运载体。 运载体的作用有哪些？ 作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 作用二：利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。 作为运载体必须具备哪些条件？ （二）基因操作的工具 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 基因的运载工具——运载体： （二）基因操作的工具 常用的运载体主要有两类： 1）细菌细胞质的质粒 2）噬菌体或某些动植物病毒 大肠杆菌的质粒： （二）基因操作的工具 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用。 四个基本步骤： （三）基因操作的基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 目的基因的提取方法 （三）基因操作的基本步骤 已知目的基因的序列 未知目的基因的序列： ：化学方法合成 目的基因 人们所需要的特定基因 建立基因文库 步骤一：目的基因的提取 1）鸟枪法： （供体细胞DNA分离） 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 受体细胞 产生特定性状 目的基因 限制酶 载入 导入 外源DNA扩增 分离 鸟枪法：使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切成若干小段 再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中,并使其表达 。如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整合到该细胞中的DNA片断就是所需要的DNA片断。 步骤一：目的基因的提取 2）反转录法： （人工合成） 目的基因的mRNA 单链DNA(cDNA) 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 步骤一：目的基因的提取 3）据已知的氨基酸序列合成DNA法 （人工合成） 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 新技术能大大简化基因工程的操作技术 1）DNA序列自动测序仪： 2）PCR技术： 对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。