基于454测序的莫高窟大气颗粒物中真菌群落特征分析.PDFVIP

第十二届全国气溶胶会议暨第十三届海峡两岸气溶胶技术研讨会 th th 2015 年10 月 The 12 National Aerosol Conference and the 13 Cross Strait Workshop for Aerosol Science Technology 基于454 测序的莫高窟大气颗粒物中真菌群落特征分析 武发思1,2,3,4，汪万福1,2,3,4.，贺东鹏1,2,3,4，徐瑞红1,2,3,4，赵林毅1,2,3,4，张国彬1,2,3,4 1.敦煌研究院保护研究所，甘肃敦煌，736200； 2. 国家古代壁画与土遗址保护工程技术研究中心，甘肃敦煌，736200； 3.古代壁画保护国家文物局重点科研基地，甘肃敦煌，736200； 4.甘肃省古代壁画与土遗址保护重点实验室，甘肃敦煌，736200 摘 要：空气微生物的监测与研究是开展文化遗产地预防性保护的关键。为探明游客参观等人为扰 动对莫高窟洞窟内、外大气颗粒物中真菌群落组成和结构的影响，本研究利用 Partisol-Plus Model 2025(USA)大气颗粒物采样器于2014 年游客量较多的―五一假期‖采集莫高窟第16窟洞窟内与洞窟外 环境大气细颗粒物(PM2.5)和粗颗粒物(PM10-2.5)样品；通过提取总DNA ，PCR 扩增，获得真菌ITS 区 序列片段；以454(GS FLX+) 焦磷酸测序技术进行高通量测序；并利用QIIME 平台分析比较洞窟内、 外颗粒物中真菌多样性；选择UNITE_ITS 数据库进行OTU 聚类及分类学分析。结果表明，在门的 水平上，子囊菌门(Ascomycota)在洞窟外样品中所占百分比分别为72%(PM2.5)和51%(PM10-2.5) 、在洞 窟内分别为64%(PM2.5)和31%(PM10-2.5) ；担子菌门(Basidiomycota)在PM2.5 中含量较高，洞窟内、外 分别占 25%和 13% 。在属的水平上，洞窟外 PM2.5 中以链格孢属(Alternaria , 14%) 、隐球菌属 (Cryptococcus, 10%)、枝孢属(Cladosporium, 5%)和细基格孢属(Ulocladium, 4%)为主，洞窟外PM10-2.5 中主要以半乳糖霉菌属(Galactomyces, 10%)和地霉属(Geotrichum, 1%)为主；洞窟内PM2.5 中主要为 Alternaria (29%)、Cladosporium(11%)、Cryptococcus(10%)、Guehomyces(3%)和曲霉属(Aspergillus , 3%)， 洞窟内PM10-2.5 中以半乳糖霉菌属(10%)、青霉属(Penicillium, 3%)、囊酵母属(Zygoascus, 2%)和布氏 白粉菌属(Blumeria, 2%)为主；部分真菌属仅出现在洞窟内PM2.5 样品中，如小球腔菌属(Leptosphaeria) 、 白粉菌属(Blumeria)和毛孢子菌属(Trichosporon)等；然而，有大量序列仍不可比对归类鉴定到真菌属 的水平(Unclassified) 。多样性分析可知，Shannon-Wiener 指数值为洞窟外 PM2.5(3.55) ＞洞窟内 PM2.5(3.09)＞洞窟内PM10-2.5(2.33) ＞洞窟外PM10-2.5(1.81) 。PCA 聚类分析显示，采样位点(洞窟内、 外)差异对PM10-2.5 中真菌群落组成和结构的影响较PM2.5 更大。综上，子囊菌门真菌在各样品中均占 绝对优势，担子菌门真菌在PM2.5 中比例也较高。洞窟内、外大气PM2.5 中真菌群落多样性整体高于 PM10-2.5 中，真菌群落结构在洞窟内、外差异明显；洞窟内特定的微生境以及大量游客参观对窟内环 境的扰动可能是引起窟内PM2.5 和PM10-2.5 中真菌群落组成和结构变化的关键因素。本研究为世界文 化遗产地敦煌莫高窟的空气质量评估和洞窟开放管理提供了重要的科学依据。 关键词：敦煌石窟，空气微生物，454 高通量测序，群落组成，文物保护 1 引言 微生物在古代壁画、石质、木质和纸质