磺胺类兽药复合污染对作物遗传毒性的影响.docVIP

　　磺胺类兽药复合污染对作物遗传毒性的影响 　　随着畜牧业的迅猛发展，各种兽药的使用量和排放量与日俱增，由此带来的环境问题也日益受到人们的关注。调查表明，我国使用的兽药中，抗微生物类用药占主导地位，市场份额约占 60%以上，其中磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类使用较多[1].磺胺类药物是一类具有对氨基苯磺酰胺结构、以磺酰胺为代表的各种衍生物的总称[2],通常作为动物饲料添加剂以亚治疗剂量添加到动物饲料中，是我国生产量和使用量最大的兽药之一[3].在长期使用过程中，细菌对磺胺类药物较容易产生抗药性，为了达到好的治疗效果，其使用量越来越大，而这些药物不会被动物体完全吸收，有50%~90%的药物以原药或代谢物形式随粪便排出体外[4-6].Elena 等[7]调查了奥地利施用畜禽粪的农用土壤中磺胺类兽药的残留含量为 20 mgkg-1;李彦文等[8]调查得到菜地土壤中磺胺类兽药的平均残留含量为 121 mu;gkg-1;唐才明等[9]、马丽丽等[10]调查得到河水污灌区土壤和底泥中磺胺甲恶唑的残留含量为21.3 mu;gkg-1.研究表明，磺胺类兽药原药及其代谢产物随动物粪尿进入环境后，很难完全转化和降解，经非生物和生物作用逐渐积累，对土壤生态和水环境等带来影响，并最终会通过食物链影响人体健康[11]. 　　目前，对于磺胺类药物污染的研究主要集中在个体水平的生态毒理效应和迁移转化等环境行为，以及对土壤环境的影响，关于其遗传毒性方面的研究开展得较少。生物细胞微核、染色体畸变、有丝分裂指数等细胞遗传学指标被公认为是评价环境化学物质遗传性的有效方法之一[12],其中微核试验具有敏感度高、快速经济、不需要精尖技术等优点[13],在环境监测中应用较为广泛。Ma[14]认为高等植物对环境中污染物引起的生物诱变和基因毒性最为敏感，且植物常被用于生物基因毒性测试和相关的土壤评估[15-16].目前关于遗传毒性的研究中，针对重金属和有机污染物开展得较多，而兽药方面的研究较少。本研究在不同浓度的磺胺类兽药单一及复合污染处理下，通过测定玉米、蚕豆、小麦根尖细胞的微核效应，判断其遗传毒性，旨在为研究磺胺类兽药复合污染对作物遗传毒性的影响奠定理论基础。 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 试验材料 　　 　　玉米、小麦和蚕豆种子均购于北京开心农场种子公司。 　　磺胺嘧啶（SD）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）购于北京博亚华牧业科技有限公司；磺胺甲恶唑（SMZ）购于寿光富康制药有限公司。3 种药品纯度均ge;99%. 　　1.2 试验方法 　　 　　1.2.1 单一兽药胁迫试验选取籽粒饱满、均匀的玉米、蚕豆、小麦种子于蒸馏水中浸泡 24 h,待种子吸水膨胀后用纱布包裹置于30 ℃培养箱中培养，每 12 h 换水一次，待根尖长至1~2 cm 时，分别选取发育良好，根尖粗细一致的种子备用。 　　将 3 种兽药分别配制成浓度为 1、5、10、50、100mgL-1的溶液，以蒸馏水作为阴性对照（CK-），以 5mgL-1的 NaN3作为阳性对照（CK+）。将种子放入不同浓度磺胺类兽药的处理液中浸泡，染毒 8~24 h,将染毒后的种子洗净并置于蒸馏水中恢复培养 24 h;切下约 1 cm 长的根尖，卡诺固定液固定 24 h 后，置于70%乙醇中，放入 4 ℃冰箱中可保存数月。实验时将根尖取出，蒸馏水洗涤 2 次后置于 1 molL-1的盐酸中，于 60 ℃水浴解离 8~10 min,至根尖呈乳白色取出，然后放入蒸馏水中冲洗 3 次，每次 5 min;用 shiff试剂染色 30 min 后漂洗制片，在显微镜下观察。 　　每个处理每种作物选取 5 个根尖，每个根尖观察不少于 1000 个细胞，统计细胞的微核数。微核率用观察到的微核数占观察细胞的千分率（M）表示，微核千分率=微核数/观察细胞数1000%.最终结果取 5组根尖观察结果的平均值。 　　1.2.2 复合兽药胁迫试验将配置好的 3 种兽药溶液两两等量等浓度混合，然后进行作物根尖染毒、固定、解离、染色、观察，方法与单一兽药处理相同。 　　1.3 数据处理采用 SPSS 软件进行方差分析和 F 检验。 　　2 结果与讨论 　　 　　2.1 单一兽药胁迫对不同作物根尖细胞微核率的影响磺胺类兽药对作物产生的毒害作用在个体和细胞分子水平都有所表现。在浓度为 1~5 mgL-1时，对作物根尖的生长没有明显的毒性，从 10 mgL-1开始，根尖生长缓慢并开始变黄，浓度达到 100 mgL-1时，根尖颜色加深并开始变硬，水解效果变差，细胞分散程度逐渐降低，部分细胞出现重叠现象。这时压片比较困难，在显微镜下观察可以看到有些细胞出现了细胞核固缩、细胞破碎的现象，如图 1 所示。较高浓度的磺胺类药物可引发细胞凋亡，细胞分裂数减少，说明磺胺类药物有