邻苯二甲酸二异癸脂对过敏性皮炎的作用机制.docVIP

　　邻苯二甲酸二异癸脂对过敏性皮炎的作用机制 邻苯二甲酸酯作为增塑剂广泛用于各种塑料产品，以增加其可塑性和柔韧性。由于传统增塑剂如邻苯二甲酸二乙基己酯 （Di（2 - e thy lhexy1）phthalate,DEHP） 毒性较大[1],一些新型增塑剂正逐渐取而代之。邻苯二甲酸二异癸脂（DIDP） ,作为一 种 常 用 的 新 型 增 塑 剂，主 要 用 于 聚 氯 乙 烯（polyvinyl chloride,PVC）、食品包装袋、地板、家具、建筑材料和医疗设备中[2].DIDP能通过多种途径进入人体，如经口摄入、皮肤接触、呼吸暴露和注射暴露等。其中经口暴露是最为普遍的暴露方式。儿童由于长期接触可放入口中的PVC玩具，其暴露于DIDP等邻苯二甲酸酯的风险较大[3].研究发现，DIDP经口暴露可以引起实验动物的肝脏肿大[4],促进过氧化物酶体的增生，而过氧化物酶体的急剧增多与啮齿类动肝癌的发生相关[5].流行病学研究发现，邻苯二甲酸酯的暴露与儿童和塑料行业工人的过敏症高发率之间存在一定的联系[6,7].已有研究表明邻苯二甲酸酯可能作为佐剂对过敏反应产生影响[8],但目前DIDP对过敏性皮炎的影响及相关机制尚不清楚。 　　 　　过敏性皮炎（allergic dermatitis,AD） 是一种由于反复接触抗原而引起的过敏性炎症性皮肤病。作为过敏性皮炎的一种，过敏性接触性皮炎（allergiccontact dermatitis,ACD） ,是一种在发达国家最常见的皮肤过敏症。研究发现，在这类过敏性皮炎的发病初期，Th2型细胞产生的IL - 4、IL - 5和IL - 13发挥着重要作用[9].Th2型细胞因子和Ig E的过量表达会进一步促进皮炎的发展[10].异硫氰酸荧光素作为一种半抗原，常被用来构建以Th2型细胞因子表达为主的ACD动物模型。氧化应激反应与多种炎症反应包括过敏性皮炎有关[11-12].褪黑素是松果体分泌的一种激素。一定浓度的褪黑素能高效清除自由基，减轻组织氧化损伤的程度[13-14],并具有一定的保健作用[15]. 　　 　　利用FITC构建小鼠过敏性皮炎模型，通过检测过敏性皮炎小鼠耳朵组织的肿胀程度和炎症因子含量探究增塑剂DIDP长期消化道暴露在FITC诱导的过敏性皮炎中的佐剂作用。同时，以抗氧化剂褪黑素为阻断剂，进一步探讨氧化应激在DIDP佐剂作用中的可能的介导作用。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1. 1材料 实验动物： 雄性Balb / c小鼠（6周龄左右，22 ~ 23g） 购于湖北省疾病预防控制中心，饲养在SPF级动物需要的屏障环境中，给予充足的水和食物。 　　 　　试剂：DIDP（Sigma,纯度gt; 99%） ,邻苯二甲酸二丁 酯 （dibutyl phthalate,DBP） （Sigma,纯 度gt;99%） ,FITC（Sigma） ,丙 酮 （sigma） ,戊 巴 比 妥 钠（sigma） ,吐温- 80（Amresco） ,褪黑素（sigma） ,小鼠总Ig E酶联免疫试剂盒（Biolegend） ,小鼠IL - 4酶联免疫试剂盒（e Bioscience） ,小鼠IFN - gamma;酶联免疫试剂盒（e Bioscience） ,微量还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒（ 南京建成） ,活性氧（ROS） 检测试剂盒（ 南京建成）。 　　 　　仪器： 低温冷冻离心机（Eppendorf - 5415R） ,超声处理器，三用电热恒温水箱，FL 800荧光酶标仪（Bio - Tek,USA）。 　　 　　溶液：①DIDP染毒液： 按照1:1的比例用吐温80对DIDP进行促溶，然后用生理盐水将促溶后的DIDP配置为20 mg / m L的原液，再用生理盐水稀释为0. 2、2、20 mg /m L的染毒液； 每天每只小鼠的DIDP灌胃量（m L） 与小鼠体重（g） 的比值是1:100,以保证最后的染毒剂量是2、20、200mg /kg /d;②0. 5% FITC: 按照0. 5%的质量体积比，以FITC作为溶质，以DBP和丙酮（1:1） 作为溶剂，充分混合后配置而成；③褪黑素： 先加无水乙醇（ 无水乙醇体积le;2%溶液总体积） 对褪黑素粉末进行促溶，然后加入所需体积的生理盐水配置成1 mg /m L的褪黑素溶液，现用现配；④麻醉剂：1. 0 g戊巴比妥钠溶于100m L高压灭菌生理盐水，配置成1%戊巴比妥钠麻醉剂，现用现配。 　　 　　1. 2实验方法 　　 　　1. 2. 1方法 将雄性Balb / c小鼠随机分为7个组，每组7只。具体分组如下：①生理盐水组（saline组） ;② 200 mg /kg /d DIDP组 （DIDP 200组） ;③FITC组；④FITC