棉花BT蛋白检测方法的探究_0.doc

棉花BT蛋白检测方法的研究 1、相关定义 1.1、共振光散射基本概念和技术特点 光散射是电磁辐射与物质间相互作用的一种表现形式。瑞利散射(Rayleigh scattering,RS)是一种散射波长等于入射波长的弹性散射,是尺度远小于入射光波长 的粒子所产生的散射现象。其散射强度受入射光波长、溶液折射率的波动值、溶液浓度 以及散射粒子的大小等因素影响[7]。共振光散射(Resonance light scattering,RLS) 是 指当瑞利散射接近或位于分子吸收带附近时,电子吸收光频率与散射频率相同时,电子 会发生共振而吸收能量并产生再次散射,这一过程称为共振瑞利散射[8-10]。其散射强度 比单纯的瑞利散射提高几个数量级[11]。由于 RLS 信号强度不再与λ 4成正比,其散射光 谱特征与吸收光谱有关,不同吸收光谱的分子会出现彼此不同的 RLS 光谱特征和相应的 RLS 峰,因此 RLS 法较单一的 RS 具有更好的选择性;研究发现,RLS 法对于大分子非键 作用非常敏感[12],有利于对生物大分子的反应过程的研究、表征以及测定;与此同时, RLS 强度和光谱特征受到离子缔合反应的影响,离子缔合反应是通过疏水作用、静电作 用等作用完成的[13]。因此,RLS 技术被用在痕量的药物、金属、非金属、有机化合物和 生物大分子等方面的测定。 共振光散射技术在应用过程中的优势日渐突出[14],主要表现在: - 2 - (l)仪器基本结构简单,功能一目了然,易于操作和检测。选择合适的激发和发射 通带宽度,令△λ=0,则 RLS 光谱可通过普通的荧光分光光度计上获得[15]。仪器光源使 用高亮 LED 替代即可,有利于该技术的推广使用和普及; (2)灵敏度高。用于微量分析灵敏度可达 10-9g; (3)拓宽了探针的范围:该技术可适用于一些无荧光的探针、无颜色变化的有机及 无机试剂探针,与分光光度法和荧光分析法相比,应用范围更宽[16]。 凡是有利必有弊,RLS 分析技术也存在缺陷,主要表现在一下几个方面: (1)本体溶液信号难以提取,选择性差:由于被分析物和共存干扰物质的信号难以 区分,因此测量结果的准确性受到影响; (2)干扰成分多,抗干扰能力及重现性差:动态光散射、Dyndall 散射和荧光等成 分通常都包含在所测得的 RLS 信号中,并且散射信号强度受共存物、折光指数、离子强 度、温度、介质极性、溶液的 pH 和入射光强度等多种因素影响,并且易受外来因素干 扰[17]。 (3)油溶性试剂使用不便:目前该技术在油溶性试剂中使用不便,研究和应用主要 集中于水溶液中,这将会在生物体中具有互不相溶性的主、客体之间的相互识别方面的 研究遭遇限制和瓶颈[18][19]。 1.2、热激蛋白的定义 热激蛋白(HSP)是细胞在一些诸如热休克、水分亏缺、重金属污染等胁迫条件下 高效表达的一大类蛋白。根据对昆虫、鸟类、鱼类、哺乳类、植物以及细菌、酵母等多 种生物的研究发现, 热应激是生物体遭受胁迫时正常蛋白的合成受阻,HSP 合成的一系 列过程[4]。 1.3、蛋白质的定义 蛋白质是一种复杂的有机化合物,是生物体最重要的组成成分之一。通常认 为蛋白质是 α 氨基酸通过酰胺键连接而成的长链分子,这一分子的长链也被称为 肽链。但是这样定义蛋白质分子还有若干不严密之处。第一,在自然界存在着许 多种氨基酸,如 ω 氨基已酸,它可以作为单体,也可以通过形成分子间的酰胺 键而成为长链分子,即我们日常生活中的尼龙 6。但是尼龙 6 不可能具有蛋白质 的空间结构,更没有蛋白质的生物活性。第二,一些酸性或碱性的氨基酸,除了 α 氨基和 α 羧基可形成酰胺键外,氨基酸残基侧链上的集团也能形成酰胺键。应 该认为,由 mRNA 转译而成的新生肽链还不能说是蛋白质。转译所得的新生肽 链只有经历一系列转译后的事件才能成为具有特定空间结构、呈现明确生物功能 的蛋白质。因此,对于蛋白质的一个比较严格的定义应该是:一种由 DNA 编码 的 L 型 α 氨基酸通过 α 碳原子上的氨基和羧基间形成酰胺键,连接而成肽链, 经转译后加工形成的具有特定空间构象和生物功能的生物大分子。当然,有相当 多的蛋白质种除了氨基酸外,还有一些其他的组分,如糖类、脂类、金属和有机 1.4、BT模式的定义 追溯有关BT模式的涵义,最早是菲律宾于1990年在6957号法令里的定 义。并且在1993年时,在7718号法令中,对BT模式的定义修订为”根据合 同安排,由项目发起者承担拟定的某项基础设施或发展设施的筹资和建设,待 项目建设完工以后即将该项目转给政府机构或有关政府单位,后者则向项目发 起人支付该项目的总投资,并加上某一合理比率的回报额《 176]。 1996年联合国工业发展组织也在《基础设施