流式细胞术多色方案的方法学探讨.pdfVIP

第 40卷 第 3期 新 疆 医科 大 学 学 报 Vo1．40 NO．3 2017年 3月 JournalofXinjiangMedicalUniversity M ar．2017 流式细胞术多色方案的方法学探讨 张 雪，刘 涛，杨 宁，卢晓梅 ，林仁 勇 (新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐 830054) 摘要 ：目的 建立流式细胞仪多细胞亚群鉴定和多色标记技术平台，探讨流式细胞术多色配色的优化方案 。 方 法 利用不同荧光抗体进行小鼠外周血标本细胞亚群的标记，通过流式细胞仪，建立流式不同配色方案，调节 电压 ，调节荧光补偿 ，同时以获得 的参数重新设置仪器 ，比较多色标记得到的不 同实验结果并分析 。结 果 优化 检测电压、补偿正确调节、荧光素的正确选择、同种细胞的标记染料重叠最小化能有效降低实验的偏差。细胞亚群 分布清晰，荧光强度 比例表达正确，与通常采用的实验样品单染色方法得到的结果一致。结论 多色配色能有 效降低实验费用，减少标本使用量 ，减少实验用时，充分利用流式细胞仪性能。 关键词：流式细胞术 ；多色；荧光 中图分类号：R331 文献标识码 ：A 文章编号：1009—5551(2017)03—0308—03 doi：10．3969／j．issn．1009—5551．2017．03．0lO A method0lo calapproach tothemulti—colorschemeofflow cytometry ZHANG Xue，LIU Tao，YANG Ning，LIN Renyong (InstituteofClinicalMedicine，theFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity， Urumqi830054，China) Abstract：Objective Toestablishamethodfortheidentificationofmulticellsubpopulationsandtoex— ploretheoptimizationofflow cytometry．Methods Thedifferentfluorescentantibodymarkersfrom dif— ferentcellsubpopulationswereusedtomarkmouseperipheralbloodceilsandestablish themulti—color schemeofflow cytometrybyflow cytometry，voltageregulation，fluorescencecompensation regulation． Then，these instrumentparameterswererecorded to setthe instrumentand the differentmulti-color markingresultswerecomparedandanalysied．Results Optimizingthedetectionvoltage，thecorrectad— justmentofcompensation，thecorrectchoiceoffluorescein，thesamecellmarkerdyeoverlapminimiza— tion，caneffectivelyreducethedeviationoftheexperiment．Thedistributionofcellsubsetswasclear。and theratiooffluorescenceintensitywasexpressedcorrectly，whichwasconsistentwiththeresultsobtained bysinglestainingmethod．Conclusion M ulticolormatchingcaneffectivelyreducetheexperimentalcost，