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细胞培养常见 26 个问题  1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或  M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM做粘附细胞培养、RPMI­ 1640 做悬浮细胞培 养，各种目的无血清培养的首选是 AIM V 培养基（SFM）  2.为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血 小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养 ES 细胞、昆虫细胞和 平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。  3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？  L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能 量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但 是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞 具有毒性。  4.GlutaMAX­I 是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX­I？这个二肽有多稳定？  GlutaMAX­I 二肽是 L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的 α－氨基用 L－丙氨酸来保 护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放 L－谷氨酰胺供利用。  GlutaMAX­I 二肽非常稳定，即使在 121 磅灭菌 20 分钟，GlutaMAX­I 二肽溶液有最小 的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。  5.为什么培养基中可以省去加酚红？ 酚红在培养基中被用来作为 PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时 为紫色。 研究表明， 酚红可以模拟固醇类激素的作用 （特别是雌激素）。 为避免固醇类反应， 培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员 在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。  6.如何用台盼兰计数活细胞？ 用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200－2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞中加入 0.1  毫升的 0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台 盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。  7.如何消除组织培养的污染？ 重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真 菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净 台，检查 HEPA 过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗 生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素 B 和抗霉菌素如泰乐 菌素时尤其重要。 下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤:  1  在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。  2  分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选 择抗生素加入到每一个孔中。 例如， 两性霉素 B 推荐下列浓度，0 .25，0 .50，1 .0，2 .0，4 .0,8.0  mg/ml。  3  每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。  4  确定抗生素毒性水平后， 使用低于毒性浓度 2－3 倍浓度的抗生素的培养液培养细胞  2－3 代。  5  在无抗生素的培养基中培养细胞一代。  6  重复步骤 4。  7  在无抗生素的培养基中培养 4－6 代，确定污染是否以已被消除。  8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？ 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但 是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。  9.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？  GIBICO 的胎牛血清 没有预老化，储存在 2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白 （如 冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影 响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。  10.目录上说，Hank’s 平衡盐溶液 （HBS）要在空气中使用，不需要 CO2 培养箱。原 因是什么？Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和 Earle’s 平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能 差别？  HBS