复方芪麝片及川芎嗪麝香酮防治腰椎间盘退变的作用机制研究.docVIP

附件2 论文中英文摘要 作者姓名：梁倩倩 论文题目：复方芪麝片及川芎嗪、麝香酮防治腰椎间盘退变的作用机制研究 中 文 摘 要 研究背景：腰痛是危害人类健康的常见病和多发病，严重地影响着患者的生活质量。中医学在治疗腰痛方面积累了丰富的临床经验，在缓解和改善腰痛方面显示出独特的疗效。总结和发扬中医药治疗本病的特色和优势，对腰痛的防治具有重要临床意义。石氏伤科是享誉沪上的一大中医骨伤科流派，“气血兼顾，以气为主，以血为先”是其核心观点。在治疗腰痛方面，石氏伤科常从气血立法论治腰痛，并取得较好疗效，而石氏伤科以气血论治腰痛的立法渊源仍需追溯。《养生论》中提到：“久立伤骨，损于肾。”直立是正常人体最基本的体位之一，但是站立过久，会导致腿与腰的疲劳和疼痛。现代研究表明腰痛和膝关节炎等疾病与直立姿势有关，认为直立姿势会加重脊柱退变，然而目前仍没有可以模拟和检测直立姿势引发疾病的合适动物模型。“复方芪麝片”是石氏伤科施杞教授根据“以气为主、以血为先”治疗椎间盘退变性疾病临床和实验研究的成果，该药立法为益气行气活血化瘀，主要用于治疗气虚血瘀型颈腰痛，但是复方芪麝片对于腰椎间盘退变的药效作用仍需明确。现在已发现IL-1(在椎间盘退变过程中起到重要作用，而中起活血化瘀作用的中药的有效成分川芎嗪和麝香酮均有抗炎作用，但其对退变椎间盘内炎症因子的作用机制仍需进行深入研究。 目的：为了追溯气血立论治疗腰椎间盘退变性疾病的中医历史根源，考察明代以前中医药治疗腰痛用药规律，明确活血化瘀法治疗腰椎间盘退变性疾病的治则地位，并建立1月龄去双前肢直立大鼠腰椎间盘退变模型，研究直立大鼠腰椎间盘退变的病理机制，并利用该模型明确益气化瘀中药复方芪麝片及川芎嗪麝香酮防治椎间盘退变性疾病的疗效，并进一步通过体外实验研究复方芪麝片中起活血化瘀作用中药的有效成分川芎嗪和麝香酮防治椎间盘退变的作用机理。 方法： 1. 明代以前腰痛用药规律的文献研究 分别以腰痛各种症状和病名为检索词，借助“《普济方》数据库管理系统”，对明代以前治疗腰痛用药情况进行检索，并用SPSS16.0统计软件，采用分层聚类分析方法分析两种检索词检索结果中用药频次排前20位的药物。 2. 建立直立大鼠腰椎间盘退变模型 将60只1月龄SD大鼠随机分为5、7、9月模型组和空白对照组，共6组（每组10只，雌雄各半），截断各模型组大鼠双前肢，置于特制饲养笼内饲养，诱导其直立，空白对照组不处理并置于普通饲养笼内饲养。分别在术后5、7、9月依次处死相对应的模型组和空白对照组大鼠，取下腰部椎间盘，并进行形态学、免疫组化、TUNEL和细胞衰老β-半乳糖苷酶染色分析以及real-time RT-PCR分析。 3. 观察复方芪麝片和川芎嗪对直立诱导腰椎间盘退变模型的影响 1月龄SD大鼠双前肢40只，随机分为空白对照组、模型组、复方芪麝片组和川芎嗪组，共四组（每组10只，雌雄各半），分别在术后6月对复方芪麝片组大鼠进行灌胃给药，川芎嗪组大鼠进行腹腔注射川芎嗪注射液给药一个月，并分别于术后7月处死相对应的四组大鼠，取下腰部椎间盘，进行藏红和天狼猩红形态学染色、免疫组化染色以及实时定量RT-PCR检测。 4. 观察川芎嗪和麝香酮对IL-1(诱导腰椎间盘终板软骨细胞的影响 分离培养大鼠腰椎间盘终板软骨细胞，用IL-1(诱导软骨细胞，分别用川芎嗪和麝香酮处理。活性细胞数目用MTT法检测，Ⅱ型胶原蛋白表达用细胞免疫化学染色检测，mRNA表达由real-time RT-PCR检测，信号分子蛋白的磷酸化用Western blot 技术分析。 结果： 1. 根据分层聚类分析结果，结合药物的功效，大致将按腰痛症状检索的用药结果分类如下：当归与川芎，附子与桂心，杜仲与牛膝，芍药、炙甘草与干姜（芍药甘草汤，甘草干姜汤），防风与酒，人参、茯苓、白术与甘草（四君子汤），萆薢与独活、细辛、生姜、石斛。按腰痛病名用药检索的结果分类如下：当归，杜仲与桂心、牛膝，附子与防风、川芎，萆薢与独活、羌活、酒，芍药、炙甘草与干姜（芍药甘草汤，甘草干姜汤）、续断，木香与槟榔，石斛与白术。 2. 形态学分析显示模型组出现特征性的腰椎间盘退行性改变，免疫组化染色发现椎间盘内Ⅱ型胶原表达降低，Ⅹ型胶原、IL-1β和TNFα表达增加；TUNEL染色发现凋亡细胞数量增加；β-半乳糖苷酶染色提示衰老细胞数目增加；Real-time RT-PCR分析发现ADAMTS-5、Col10α1、MMP3、MMP13、IL-1β、COX2、IL-6、iNOS和TNFα mRNA表达显著增加，Col2α1和aggrecan mRNA表达显著减少。 3. 形态学藏红染色显示川芎嗪增加了直立7月后椎间盘高度，复方芪麝片和川芎嗪均可以防止纤维环撕裂和板层紊乱情况，增加软骨终板非钙化层胶原基质，防止终板