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sp8原理及应用
Living up to Life
激光共聚焦显微镜技术
The techniques and applications of
Confocal Laser Scanning
Microscopy
Living up to Life
分辨率 Living up to Life
人眼分辨率: 0.20mm
光学显微镜分辨率:0.25 μm
共焦显微镜分辨率:0.18 μm
电子显微镜分辨率:0.20nm
激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史Living up to Life
• 1957年,Marvin Minsky提出了共聚焦显微
镜技术的某些基本原理,获得了美国的专利。
• 1978年,阿姆斯特丹大学的G.J.Brakenhoff
首次展示了改善了分辨率的共焦显微镜。
• 1985年,Wijnaendtsvan Resandt推出了第一
台对荧光标记的材料进行光切的共焦显微镜
Living up to Life
激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史
•80年代末,各家公司都推出了商品化的共
焦显微镜。
•近二十年来,从滤片型到光谱型,人们对
共焦高分辨率,采集图像快速,技术的改
进及应用开发不断进行,出现了很多新的
技术。如双光子共焦,FCS,FLIM 等。
Living up to Life
激光共聚焦显微镜技术
• 电子显微镜的缺陷:
1.只能观察固定样品
2.样品制备过程(固定、包埋、切片)造成的假象
•荧光显微镜的缺陷:
1.可以观察活细胞或组织,但细胞或组织内结构高度重叠。
2.荧光具有强散射性,造成图像实际清晰度的大大下降。
3.荧光漂白很快,使荧光图像的拍照有困难。
4.如果荧光滤片选配不当,多荧光标记样品图像的采集很困难,
且很难抑制光谱交叉。
Living up to Life
普通荧光显微镜
VS
激光扫描共聚焦显微镜
Living up to Life
Fluorescent Microscope vs confocal
共焦显微镜的优点 Living up to Life
• 共焦显微镜与传统显微镜的区别
1.抑制图像的模糊,获得清晰的图像
2. 由于点对点扫描去除了杂散光的影响
Living up to Life
激光扫描共焦显微镜技术
• 共焦显微镜与传统显微镜的区别
3. 具有更高的轴向分辨率,并可获取连续光
学切片
Z=0.35m
Living up to Life
共聚焦显微镜的特点
Living up to Life
Basement membrane cy2 (green)
Neurons cy3 (red)
能有效排除焦平面以外的光信号干扰
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