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sp8原理及应用.pdf

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sp8原理及应用

Living up to Life 激光共聚焦显微镜技术 The techniques and applications of Confocal Laser Scanning Microscopy Living up to Life 分辨率 Living up to Life 人眼分辨率: 0.20mm 光学显微镜分辨率:0.25 μm 共焦显微镜分辨率:0.18 μm 电子显微镜分辨率:0.20nm 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史Living up to Life • 1957年,Marvin Minsky提出了共聚焦显微 镜技术的某些基本原理,获得了美国的专利。 • 1978年,阿姆斯特丹大学的G.J.Brakenhoff 首次展示了改善了分辨率的共焦显微镜。 • 1985年,Wijnaendtsvan Resandt推出了第一 台对荧光标记的材料进行光切的共焦显微镜 Living up to Life 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 •80年代末,各家公司都推出了商品化的共 焦显微镜。 •近二十年来,从滤片型到光谱型,人们对 共焦高分辨率,采集图像快速,技术的改 进及应用开发不断进行,出现了很多新的 技术。如双光子共焦,FCS,FLIM 等。 Living up to Life 激光共聚焦显微镜技术 • 电子显微镜的缺陷: 1.只能观察固定样品 2.样品制备过程(固定、包埋、切片)造成的假象 •荧光显微镜的缺陷: 1.可以观察活细胞或组织,但细胞或组织内结构高度重叠。 2.荧光具有强散射性,造成图像实际清晰度的大大下降。 3.荧光漂白很快,使荧光图像的拍照有困难。 4.如果荧光滤片选配不当,多荧光标记样品图像的采集很困难, 且很难抑制光谱交叉。 Living up to Life 普通荧光显微镜 VS 激光扫描共聚焦显微镜 Living up to Life Fluorescent Microscope vs confocal 共焦显微镜的优点 Living up to Life • 共焦显微镜与传统显微镜的区别 1.抑制图像的模糊,获得清晰的图像 2. 由于点对点扫描去除了杂散光的影响 Living up to Life 激光扫描共焦显微镜技术 • 共焦显微镜与传统显微镜的区别 3. 具有更高的轴向分辨率,并可获取连续光 学切片 Z=0.35m Living up to Life 共聚焦显微镜的特点 Living up to Life Basement membrane cy2 (green) Neurons cy3 (red) 能有效排除焦平面以外的光信号干扰

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