sp8原理及应用.pdf

Living up to Life 激光共聚焦显微镜技术 The techniques and applications of Confocal Laser Scanning Microscopy Living up to Life 分辨率 Living up to Life 人眼分辨率： 0.20mm 光学显微镜分辨率：0.25 μm 共焦显微镜分辨率：0.18 μm 电子显微镜分辨率：0.20nm 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史Living up to Life • 1957年，Marvin Minsky提出了共聚焦显微 镜技术的某些基本原理，获得了美国的专利。 • 1978年，阿姆斯特丹大学的G.J.Brakenhoff 首次展示了改善了分辨率的共焦显微镜。 • 1985年，Wijnaendtsvan Resandt推出了第一 台对荧光标记的材料进行光切的共焦显微镜 Living up to Life 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 •80年代末，各家公司都推出了商品化的共 焦显微镜。 •近二十年来，从滤片型到光谱型，人们对 共焦高分辨率，采集图像快速，技术的改 进及应用开发不断进行，出现了很多新的 技术。如双光子共焦，FCS,FLIM 等。 Living up to Life 激光共聚焦显微镜技术 • 电子显微镜的缺陷： 1.只能观察固定样品 2.样品制备过程（固定、包埋、切片）造成的假象 •荧光显微镜的缺陷: 1.可以观察活细胞或组织，但细胞或组织内结构高度重叠。 2.荧光具有强散射性，造成图像实际清晰度的大大下降。 3.荧光漂白很快，使荧光图像的拍照有困难。 4.如果荧光滤片选配不当，多荧光标记样品图像的采集很困难， 且很难抑制光谱交叉。 Living up to Life 普通荧光显微镜 VS 激光扫描共聚焦显微镜 Living up to Life Fluorescent Microscope vs confocal 共焦显微镜的优点 Living up to Life • 共焦显微镜与传统显微镜的区别 1.抑制图像的模糊，获得清晰的图像 2. 由于点对点扫描去除了杂散光的影响 Living up to Life 激光扫描共焦显微镜技术 • 共焦显微镜与传统显微镜的区别 3. 具有更高的轴向分辨率，并可获取连续光 学切片 Z=0.35m Living up to Life 共聚焦显微镜的特点 Living up to Life Basement membrane cy2 (green) Neurons cy3 (red) 能有效排除焦平面以外的光信号干扰