植物常规染色体制片-染色和镜检.pdf

实验三 植物常规染色体制片Ⅲ --染色和镜检染色和镜检 （综合性实验） 遵义师范学院生命科学学院遵义师范学院生命科学学院 韦若勋韦若勋 实验目的 一、实验目的 1、掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方 1 掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方 法； 2、观察察各分裂时期染时期染色体形态,,测量典型染染 色体长臂和短臂； 3、熟悉染色液的配制； 4、了解植物染色体核型分析的标准。 二 实验原理 二、实验原理 1、着色观察原理 姬母萨是伊红、天青色素和次甲蓝组成的复合染料。伊 红是酸性染料，能与蛋白质带正电荷的氨基结合呈红色；次 甲蓝是碱性染料甲蓝是碱性染料，能与蛋白质带负电荷的羧基结合呈蓝色能与蛋白质带负电荷的羧基结合呈蓝色。 包装染色体的蛋白质有大量的氨基和羧基，通过静电引力能 与与GiemsaGiemsa有色基团结合着色有色基团结合着色。 因着丝粒和次缢痕蛋 主缢痕 白质包装量比较少。请问 他们的着色程度比染色体 臂应该是深些还是浅些？ 二、实验原理 2、核型分析原理 因着丝粒在染色体上的位置差异导致因着丝粒在染色体上的位置差异导致了各染色各染色 体形态差异。Denver将人体染色体划分成四大类型 请问请问：DDenver划分如下划分如下44类染色体的臂比临界类染色体的臂比临界 值标准是多少？ 三实验器具及试剂 (一)实验器具 1、显微镜 请注重显微镜使用请注重显微镜使用登记和保养登记和保养。 2、恒温箱 注意显示温度校正和使用登记 三实验器具及试剂 (二)实验试剂 1、45%醋酸 量取45ml冰醋酸，蒸馏水定溶至100ml。 22、姬姆萨母液姬姆萨母液 姬姆萨3.8g与甘油250ml研磨15分钟，60℃水浴2小时， 加60℃预热甲醇250m1，混匀、过滤，棕色瓶室温长期保存。 33、磷酸缓冲磷酸缓冲液液 称Na HPO 4.735g，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml； 2 4 称KH PO 5.35g ，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml，等量混 2 4 合合。 四四、实验材料实验材料 涂片法得到的蚕豆或其它植物根涂片法得到的蚕豆或其它植物根 尖制片。 五 实实验方法与步骤 1、染色 （（11））方法方法 ① Giemsa母液︰缓冲液 = 1 ︰ 7，配成稀释液； ②② 浸没浸没全部全部材料材料，室温室温染色染色1515-3030miin； ③ 染色后,用小流量自来水冲洗玻片至无色，晾 干干。 （2）注意事项 ①① 染色染色前材料要前材料要一定要干定要干，否则着色否则着色不佳不佳； ② 植物固定时间长易着色,反之则反。 第一部分 植物染色体标本制备 五、实验方法与步骤 2、镜检观察 将染好色的装片置于显微镜下观测，如有效果好 的染色体装片可制成永久装片保存。 物种：蚕豆根尖 细胞有丝分裂 . 2014.6.5 姓名：××× 五五、实验方法与步骤实验方法与步骤 2、镜检观察 （1）分裂细胞观察 低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形态。估计染色体 数目。 40倍下观察，记录3个视野的细胞总数、分裂细胞和典型染 色体细胞数色体细胞数；；计算出分裂细胞及典型染色体图象细胞