选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对胃癌细胞增殖的影响.pdfVIP

浙江大学2006届硕士学位论文 1材料和方法 1．1主要试剂 公司)、小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)。 1．2主要仪器： 恒温CO。培养箱(美国SheIdon公司) 倒置显微镜(重庆光学仪器厂)； 透射电镜(日立H600型)； 流式细胞仪(FACS，美国BD公司)； 酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂) scie埘fic公司。 一70℃冰箱购于美国Fo衄a 1．3细胞培养： 人胃癌细胞株SGC．7901购自中科院上海细胞库。SGC．7901细胞以 RPMI．1640培养基，加入10％小牛血清和loo u／IIll青霉素及100mg／血链霉素， 于37℃、5％c02孵箱内培养，2～3天传代一次。 1．4 MTT法检测尼美舒利对sGc．7901细胞抑制率的影响 取对数生长期sGC．7901细胞制成细胞悬液，以每孑L5×104个细胞接种于96 每种浓度设4个复孔。继续培养24h、48h、72h、96h后，每孔分别加人 荡10分钟，用酶标仪测定570nm波长处的吸光值(o埘caldens时value，OD值)。 7 浙江大学2006届硕士学位论文 2．结果 2．1 倒置显微镜观察尼美舒利作用后，胃腺癌细胞SGc．7901形态学的变化 透射电镜检测可见未加药的对照组细胞核仁清楚，细胞外布满丝状微绒毛， 经尼美舒利处理后，不贴壁的细胞数增多，细胞出现皱缩、变小、变圆、细胞器 肿胀、染色质聚集于核膜下、细胞内颗粒状物增多等变化，胞浆内可见凋亡小体 形成。 2．2 MTT检测尼美舒利对SGC．7901细胞增殖的影响 MTT法测定细胞生长。如图1所示：不同浓度的尼美舒利对胃腺癌细胞SGc一790l 的增殖均有抑制作用，呈时间一剂量依赖性抑制细胞生长。20儿Inol／L的尼美舒利 抑制率最低，作用不同时间(24h，48h，72h，96h)后的抑制率分别是：14．1 ％。 9 浙江大学2006届硕士学位论文 表l尼美舒利对细胞周期的影响 浙江大学2006届硕士学位论文 图2(无尼美舒利作用72h后的细胞周期分析) 图3(20“mol／L尼美舒利作用72h后的细胞周期分析) 浙江大学2006届硕士学位论文 图4(50umol／L尼美舒利作用72h后的细胞周期分析) 图5(100umo儿尼美舒利作用72h后的细胞周期分析) 浙江大学2006届硕士学位论文 图6(200umol／L尼美舒利作用72h后的细胞周期分析) 图7(400umol／L尼美舒利作用72h后的细胞周期分析) 14 浙江大学2006届硕士学位论文 3讨论 cOx-2是一种诱导型酶，在正常生理状态下多数组织内检测不到。而在许多 肿瘤组织和转化细胞中存在着COx．2的高表达。有研究表明，在胃癌组织、癌前 病变的腺瘤或增生性组织中，发现coX．2的表达明显增高【6】a胁masill曲e等【71研 究发现36％的贲门癌及60％的胃体癌呈阳性表达。Murata等‘81研究也同样证实 cox．2在胃癌组织中表达明显升高。同时，发现cOx一2具有过氧化物酶活性，可 使致癌剂发生氧化反应，从而导致致癌剂激活导致肿瘤发生【10】；它的过度表达 与肿瘤新生血管形成有关‘¨】：它还会促进肿瘤细胞增殖，抑制其凋亡【9】以及提高 肿瘤发生及转移的潜能，增加肿瘤细胞的侵袭力【12】等。因此，COX一2有望成为 成为肿瘤防治的一个新靶点。 尼