大肠杆菌I型分泌表达系统研究进展及提高蛋白表达量的策略.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（６）：９８１０４ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 大肠杆菌Ｉ型分泌表达系统研究进展及 提高蛋白表达量的策略 王靖瑶　王天女　卢　磊　张　帅　赵　敏 （东北林业大学生命科学学院　哈尔滨　１５００４０） 摘要　大肠杆菌是表达重组蛋白最常用的宿主之一。利用大肠杆菌分泌途径胞外表达重组蛋白 具有可促进蛋白正确折叠，有效减少包涵体形成，简化纯化工序等诸多优势，近年来备受关注。 其中，大肠杆菌Ｉ型分泌途径具有分泌表达速度快，蛋白活性高，对宿主代谢无影响等特点，是目 前应用最广泛的分泌途径之一。综述了大肠杆菌Ｉ型分泌系统的元件组成和分泌机理及提高Ｉ 型分泌系统蛋白表达量的有效策略，为重组蛋白生产应用提供了理论依据。 关键词　大肠杆菌　胞外表达　重组蛋白　Ｉ型分泌途径　高效分泌策略 中图分类号　Ｑ７８６ ［５］ 　　大肠杆菌是用来表达重组蛋白的首选宿主之一。 径 。大肠杆菌Ｉ型分泌系统（ｔｙｐｅＩｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ， 大肠杆菌遗传背景清楚，操作简单，生长周期短，成本 ＴＩＳＳ）也称 溶血素（ＨｌｙＡ）分泌系统，目的蛋白ＨｌｙＡ α ［１］ 低，易于大规模培养 ，已经用来表达多种酶制剂和药 经过由ＨｌｙＢ，ＨｌｙＤ，ＴｏｌＣ组成中空的跨膜通道直接分 物制剂，目前市场上有４０％的重组制剂由大肠杆菌表 泌至胞外。ＩＩ型分泌系统是大肠杆菌分泌蛋白的主导 ［２］ 达生产 。即便如此，由于大肠杆菌的翻译后修饰能 分泌途径（ｍａｉｎｔｅｒｍｉｎａｌｂｒａｎｃｈ，ＭＴＢ），蛋白借助Ｓｅｃ途 力较弱，在表达多数结构复杂的蛋白过程中会导致蛋 径，信号识别颗粒（ＳＲＰ）通路或双精氨酸转移途径 白折叠错误聚集形成无活性的包涵体，严重影响蛋白 （ＴＡＴ）转运到细胞周质，然后再依赖于膜上特异性分 表达量。目前多数蛋白在大肠杆菌胞内表达，需要通 ［５］ 泌装置分泌到胞外 。目前大多数的重组蛋白利用ＩＩ 过破碎处理获取目的蛋白，且宿主胞内背景蛋白影响 型分泌系统表达，但是由于分泌元件有限，蛋白常常聚 蛋白纯化。但利用大肠杆菌分泌系统表达重组蛋白能 集在周质或胞内，还需结合基因化学物理等方法实现 提高蛋白稳定性及可溶性，保留蛋白Ｎ端真实性，减少 ［６］ 分泌 。相比之下，Ｉ分泌系统采取“一步介导式”分泌 宿主代谢负担，有效简化蛋白纯化过程，节省生产成 法，蛋白不经过周质中间体直接分泌，有效减少了两步 本［３］。本文综述了常用的大肠杆菌Ｉ型分泌系统及其 ［７８］ 跨膜带来的损失 ，且周质还原态环境有利于蛋白正 表达重组蛋白的研究进展，为人们了解大肠杆菌分泌 ［３］ 确折叠，提高蛋白酶的活性