慢性乙型肝炎患者PD-1启动子区域甲基化状态地的研究.pdf

r¨文摘望 第二部分淋巴细胞系Molt-4细胞PD一1启动子区域甲 基化水平和PD一1表达的关系的研究 目的 以T淋巴细胞株Molt一4细胞为模型，探讨l=|_I基化抑制剂5一 杂氯胞苷(5-Zac)对淋巴细胞表而程序陆死亡受体1(PD一1)基阁肩 动子的去甲基化作JIJ及其诱导的PD1基凼表达的改变，并进一步研究 Zac 去甲基化作片j与PD—l基凼表达之问关系。方法以不同浓度的5 (0umol·Ll、5umol·L-I、10umol-L-1)作用于体外培养的 细胞比例和细胞凋亡率：反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)榆N5一Zac 作用后PD一1基因mRNA的转录水平：业硫酸氢钠处理各组Molt一4细胞 DNA，PCR扩增PD—l启动子基因片段，转化感受态大肠杆菌，挑克隆测 序，检测扩增的PD一1启动子片段甲基化状态。 结果0umol·L-1、5umol·L-1、10umol·L-1的5一氮杂胞苷作用 于mo]t一4细胞72h后，PD一1在细胞表面的表达率分别为：l13_+0．01％： 1896+1 87％；6309二6．25％，并呈现浓度依赖性；PD-l基NmRNA表达 umol-L一1、 量显著增加；细胞凋亡检测结果显示与未处理组相比，2n5 lOu 三组凋亡率分别为：19％二006％；8．98％二l_36％；24．5％±368％，有显 著忡差异(PO01)；三{!l_【DNAⅡ硫酸氯钠测序结果表明．加入‘11楚 化{$NN5Zac处理后，PD—I启动子上一60lbp和d一553bpCG,fZ去甲基 化程度明显增高。 盟!堂丝堡墨 生皇塑翌 结论q}基化抑制荆5一Zac口，导致体外培养的T淋巴细胞系Mol卜4 细胞表面程序4件死亡受体一1(PD—1)表达显著增加，PD一1基因mRNA表达 增加，细胞凋亡率增高，这种增高可能与PDl基劂肩动子区域出现的 低甲基化有关。 关键词：程序性死亡受体一1，去甲基化，5杂氮胞苷，砸硫酸氢钠 测序 p文摘篮 第三部分 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞PD一1基因 启动子区域甲基化状态及影响因素 目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞上程序性死亡受 体l表达和PD一1启动子区域甲丛化水平的关系，以及HBeAg对慢性 己型肝炎患者外周血单个核细胞表面PD一1基凼肩动子区域甲基化状 态的影响 例、慢性乙型肝炎患者HBeAg阴性者10例，实时定量聚合酶链反应 (real—timeRT—PCR)检测外周血单个核细胞中PD一1基因的mRNA表达 水平；亚硫酸氢钠处理PBMCs细胞DNA，PCR扩增PD一1启动子基周片段， 转化感受态火肠杆菌，挑克隆测序，检测扩增的PDl启动子片段甲基 化状态。 10±0 结果与正常对照组(0 023)比较，慢性乙型肝炎患者外周 血单个核细胞中PD一1mRNA表达水平明显升高。在慢性肝炎患者中， 细胞上的表达呈负相关：PD—l启动子上553bp、538、483CPG位点 甲基化程度与血清中e抗原可能存在卡目关性。 结论PDl基凼启动子区域甲基化水平可能影响慢性乙肝患者外 周血单个核细胞J2PD—l表达；其基因启动子甲基化状态nr能受到乙肝 病毒e抗原影响。 关键词：程序性死亡受体一1，慢性乙型肝炎，去甲基化，亚硫酸氢 t由测序 照文摘要 ABSTRACT Partone：The andinfluencefactorsof