乙型肝炎病毒拉米夫定耐药核酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及其探针.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN102251059A* (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 102251059 A (43)申请公布 日 2011.11.23 (21)申请号 201110194236.X C12R 1/93 (2006.01) (22)申请 日 2011.07.12 (71)申请人 武汉百泰基因工程有限公司 地址 430223 湖北省武汉市东湖开发区大学 园路武汉大学科技园宏业楼五楼 (72)发明人 唐景峰 王业富 刘绪 (74)专利代理机构 北京三高永信知识产权代理 有限责任公司 11138 代理人 孟阿妮 (51) Int.C l. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) 权利要求书 3 页 说明书 17 页 C12N 15/11 (2006.01) 序列表 5 页 附图 16 页 (54) 发明名称 乙型肝炎病毒拉米夫定耐药核酸定量检测试 剂盒、检测方法、引物及其探针 (57) 摘要 本发明公开了乙型肝炎病毒拉米夫定耐药核 酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及其探针。本 试剂盒包括荧光定量PCR 反应液，其中包括DEPC 处理水、具有5’→3’外切活性的DNA 聚合酶、 2+ dNTPs、10×荧光定量PCR Buffer、含有Mg 离子 的溶液、rt204 位点正向引物、rt204 位点反向引 物、rt204M 位点探针、rt204I位点探针、rt204V 位 点探针、rt180 位点正向引物、rt180 位点反向引 物和rt180L 位点探针、rt180M 位点探针 ；试剂盒 中还包括DNA 提取液、阴性质控品、工作标准品、 阳性质控品和临界阳性质控品。本发明采用实时 荧光定量PCR 技术定量检测乙型肝炎病毒拉米夫 定耐药毒株，荧光定量PCR 方法改进为“2 步法”， 避免了PCR 延伸的步骤 ；探针可以标记多种荧光 A 9 标记，同时还具有特异、灵敏、快速、操作简便的优 5 0 点。 1 5 2 2 0 1 N C CN 102251059 A 权 利 要 求 书 CN 102251062 A 1/3 页 1. 一种乙型肝炎病毒拉米夫定耐药核酸定量检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒含 有： (1) 荧光定量PCR 反应液： 其中包括DEPC 处理水、具有5’→3’外切活性的DNA 聚合酶、dNTPs、10×荧光定量 2+ PCRBuffer、含有Mg 离子的溶液、rt204 位点正向引物、rt204 位点反向引物、rt204M 位 点探针、rt204I 位点探针、rt204V 位点探针、rt180 位点正向引物、rt180 位点反向引物和 rt180L 位点探针、rt180M 位点探针 ； ①204 位点引物和探针 rt204 位点正向引物序列为：5′GGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTG 3′； rt204 位点反向引物序列为：5′TCAAGATGTTGTACAGACTTGGCC 3′； rt204M 位点探针序列为：5′CATCATCCATATAACTG 3′； rt204I 位点探针序列为：5′CACATCATCAATATAACT 3′； rt204V 位点探针