实验一动物实验技术基础.doc

实验一 动物实验技术基础 一、实验目的和要求 1．组织学生观看药理学实验教学的录像，帮助学生直观地了解常用的药理学实验方法和操作，并通过后续的动物实验进一步巩固和熟悉动物实验的基本操作技术。 2．学习动物捉持、性别辨认、称重、标记、去毛、给药(灌胃、皮注、肌注、腹腔注射、静脉注射、淋巴囊注射)、采血、麻醉、解剖、缝合、处死等动物实验基本技术。 二、主要仪器设备 昆明种小白鼠（每人操作一只），体重18～22g，雌雄不限。鼠笼、电子天平、烧杯、毛笔、1%苦味酸溶液、手术剪（弯尖）、灌胃器、蒸馏水、注射器（1mL）、针头（5~10号）、微量注射器（25、50或100μL）、小鼠尾静脉注射固定筒、台灯、1.5mL离心管、肝素、乙醚、脱脂棉、基础外科手术器械（套）、医用缝合针线（套）、红霉素软膏。 三、实验方法 (1)动物捉持 小白鼠：右手抓住鼠尾，放在台上或鼠笼盖铁丝网下，然后用左手拇指沿其背部向前抓住其颈部皮肤，并以左手的小指和掌部夹住其尾固定在手上。另一抓法是只用左手，先用食指和拇指抓住小鼠尾尖，后用手掌及小指夹住其尾巴，再以拇指及食指捉住其颈部皮肤。前一方法易学，另一方法稍难，但便于快速捉拿给药。 (2) 性别辨认 药理学实验常用的动物中，较大的动物(如家兔、猫、犬等)可以从生殖器分辨其性别，而较小的动物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性别鉴别，通常以肛门与生殖孔之间的距离来判断，距离近者为雌性，距离远者为雄性。 (3) 称重 将小鼠置于50mL小烧杯内，将烧杯置于电子天平上，待小鼠稳定后读数。 (4) 标记 药理实验中常用多只动物同时进行实验，为避免混乱应将动物进行编号。实验动物编号的目的在于将观察范围内的同种动物进行区别，以便于观察。常用的方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法和号牌法等，可根据实验目的、动物种类和具备的条件选用，一般编号应具有清晰易辨、简便耐久的特点。猫、犬、兔等较大的动物可用特别的号码牌固定于身上。小白鼠、大白鼠及白色家兔等用黄色苦味酸涂于动物不同部位进行染色标记而编号。例如在小白鼠，右前肢皮肤外侧涂色标记为1号，腹部右外侧皮肤涂色标记为2号，右后肢皮肤外侧涂色标记为3号，头部皮肤涂色标记为4号，背部正中皮肤标记为5号，尾巴根部标记为6号，7、8、9号在左侧同1、2、3号，第10号不涂黄色。大白鼠的编号与小白鼠相同。 (5) 去毛 用弯尖手术剪将动物手术部位的毛发剪掉，用75%乙醇擦洗祼露的皮肤。 (6) 给药 小鼠灌胃（PO）法：将小鼠固定后，右手持装有灌胃器的注射器，自口角外插入口腔，沿上颚插入食道。如遇阻力，可将注射器拔出再插，以免穿破食道或误入气管，造成动物死亡。灌胃容量一般为0.1—0.2ml/10g，不超过0.5ml/只。 小鼠皮下注射法：两人合作，一人一手抓住小白鼠头部皮肤，另一手抓住鼠尾。另一人注射药物。注射部位在背部皮下组织。如一人操作时，左手抓鼠尾，让鼠爬在铁丝笼上，右手将抽好药液的注射器针头插入背部皮下组织。如一人操作时，左手抓鼠尾，让鼠爬在铁丝笼上，右手将抽好的药液的注射器针头插入背部皮下将药注入。注射量不超过0.5ml/只。 小鼠腹腔注射法：左手持鼠，右手持注射器从下腹左或右侧（避开膀胱）朝头部方向刺入，宜先刺入皮下，经2—3mm再刺入腹腔，此时针头与腹壁的角度约45度。针尖插入不宜太深或太近上腹部，避免刺破内脏，注射量一般为0.1—0.25ml/只。 小鼠尾静脉注射法：将小鼠置于固定器内，使其尾巴露出，用70%酒精擦尾部，或将鼠尾浸入50℃热水中。待尾部静脉扩张后，左手拉尾，右手进针。注射容量不超过0.5ml/只。 (7) 采血（录像演示） 小鼠和大鼠 　　剪尾取血法：将清醒鼠装入深颜色的布袋中，将鼠身裹紧，露出尾巴，用酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张，剪断尾尖后，尾静脉血即可流出，用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球压迫止血。也可采用交替切割尾静脉方法取血。用一锋利刀片在尾尖部切破一段尾静脉，静脉血即可流出，每次可取0.3～0.5 ml，供一般血常规实验。三根尾静脉可替换切割，由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝，需要全血时，应事先将抗凝剂置于采血管中，如用血细胞混悬液，则立即与生理盐水混合。 　　眼球后静脉丛取血法：左手持鼠，拇指与中指抓住颈部皮肤，食指按压头部向下，阻滞静脉回流，使眼球后静脉丛充血，眼球外突。右手持1％肝素溶液浸泡过的自制吸血器，从内呲部刺入，沿内下眼眶壁，向眼球后推进4～5 mm，旋转吸血针头，切开静脉丛，血液自动进入吸血针筒，轻轻抽吸血管(防止负压压迫静脉丛使抽血更困难)，拔出吸血针，放松手压力，出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管(管长7～10 cm，前端拉成毛细管，内径0.1～1.5 mm，长为1 cm，后端管