核黄素的研究.doc

核黄素的化学性质的研究 周丽丽 胡 北 崔胜云( 长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室（延边大学） 吉林 延吉 133002 摘要： 研究了核黄素在不同酸度溶液中的Uv-vis吸收和荧光光谱特性利用连二亚硫酸钠(保险粉)对核黄素荧光发射的猝灭作用，通过测定样品加入猝灭剂前后的荧光光谱的方法选择性测定了不同厂家不同品牌啤酒样品中核黄素含量。测定结果表明，所选啤酒样中的核黄素含量0.02597-0.03429(g/mL范围之内。本测定结果对基体复杂样品定量测定核黄素含量提供重要的方法学的依据。 关键词：核黄素；荧光光谱分析法；紫外分光光度法；荧光猝灭 Riboflavin Analysis in beer Using Spectrofluorimetric Method Zhou lili, Hu Bei and Cui shengyun Uv-vis spectrometric and fluorometric properties of riboflavin has been investigated in different solutions with different acidity.Riboflavin generate strong fluorescent emission in HAc-NaAc solution, which can totally be extinguished by addition of Na2S2O4 . Selective determination of riboflavin in beer has been established by recording the difference of fluorometric emision intensity before and after additon of Na2S2O4 in the solutions. The results indicated that the content of riboflavin in beers ranges from 0.02597-0.03429(g/mL The method effectively eliminates metrix interferences and applicable to determination complex matrix samples. Keywords: Riboflavin; fluorospectrometry; Uv-vis spectrometry; fluorescence quenching 引言 核黄素不能在人体内自合成，只能从食物和外源性补充剂中摄取。因此，对食品和药物中核黄素含量的测定具有重要的实际意义。至今测定核黄素的方法报道较多，如紫外分光光度法1，电化学法，高效液相色谱法、毛细管电泳法、荧光光谱法等。其中荧光光法灵敏度高、选择性好等特点广泛应用于食品中的核黄素含量的测定。然而，当测定样品基体组成复杂（像食品等样品）时，该方法受基体荧光成分的干扰较大，故需要分离干扰成分等前处理过程，使得分析操作变得繁杂、耗时。据文献报道，低亚硫酸钠440-500nm 激发光下，对核黄素产生的绿色荧光具有选择性猝灭作用。 本文利用低亚硫酸钠对核黄素的荧光猝灭作用，利用猝灭前后的荧光强度之差消除样品中荧光干扰，利用该方法测定了啤酒中的核黄素含量。本方法操作简单、方法可靠，是基体成分含荧光干扰成分的样品中核黄素测定的简便分析方法。 1实验部分 1.1仪器和试剂： RF-5301 荧光分光光度仪(岛津公司)，UV-8500 紫外分光光度仪(天美公司)，pHS-3C 型实验室酸度计。核黄素（Sigma公司），其它试剂皆为分析纯试剂，实验用水为二次蒸馏水。 1.2 实验方法 核黄素标准储备液：准确称取0.0038g 经干燥的核黄素粉状结晶，置于100mL容量瓶，加入pH=4.5醋酸—醋酸钠缓冲液。将容量瓶置于温水中摇动，待其溶解，冷至室温，移至棕色瓶内，加少许甲苯盖于溶液表面，放置于冰箱中保存。使用时用醋酸醋酸钠缓冲液调节溶液pH并稀释至测定浓度。 1.3样品处理：B2 片样品的处理 取 10 片 VB2 片研细，准确称取0.1000g维生素 B2 片粉末，加pH=4.5醋酸—醋酸钠缓冲液100 ml 棕色容量瓶，超声 20 min，摇匀，用干燥滤纸滤过，量取滤液1 ml，置另10ml 棕色容量瓶，以pH=4.5醋酸—醋酸钠缓冲液B2 片溶液，测其荧光强度。 1.3.2标准加入法测定维生素B2 片中 VB2 的含量 平行取五份相同量的维生素B2 片的溶液，后四份溶液分别定量加入不同浓度的核黄素