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植物实验论文 摘要：研究了生长在两种不同环境中的植物（无污染和污染）的生理特征，通过对叶片中一些物质的测定，如：叶绿素含量、过氧化物酶活性、游离脯氨酸含量、MDA含量、可溶性蛋白含量等，观察植物在逆境的胁迫下生理所产生的变化。 关键词：迎春花 逆境胁迫 生理指标 材料选择 选择实验材料为迎春花枝条倒2、3对叶片 实验组：取南京市尧化门污染较严重地区生长的迎春花叶片 对照组：取南京师范大学仙林校区内迎春花叶片作为未污染的对照。 叶绿素含量的测定（分光光度法） 2.1 实验原理 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度c以及光径L成正比，即A=аcL（为该物质的吸光系数）。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可以通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光值而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度值就等于各组分在相应波长下的吸光度总和，这就是吸光度的加和性。欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b的含量，只需测定该提取液在两个特定波长下的吸光度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 列出关系式： 叶绿素a的含量：Ca=0.0127A663-0.00269A645 叶绿素b的含量：Cb=0.0229A645-0.00468A663 叶绿素总量：ct(mg/L)=ca+cb=20.21A645+8.02A663 2.2 实验试剂、仪器 仪器：分光光度计、研钵、小烧杯、漏斗、50ml容量瓶 试剂：蒸馏水、丙酮 2.3 实验步骤 （1）叶绿体色素溶液的提取：选取生在校园和尧化门两个不同生长环境中的植物叶片用95%的乙醇进行提取。 （2）测定吸光度值：以95%的乙醇溶液作为参比溶液，分别在652nm、663nm、645nm处测定叶绿体色素提取液的光吸收值。 （3）计算：将测得的光吸收值代入公式计算出叶绿素a、b和叶绿素总量。 注意：在有叶绿素存在时，用分光光度法也可以同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。因此要对以上公式进行修正： ca=12.21A663-2.81A645 cb=20.13A646-5.03A663 cx=(1000A470-3.27ca-104cb)/229 cx为类胡萝卜素的浓度 2.4 实验结果 污染地区（尧化门）迎春花叶片 非污染地区（南师大校园）迎春花叶片 叶绿素A含量 115.6751 102.3485 叶绿素B含量 49.609 47.7282 A:B 2.33 2.144 3、过氧化物酶活性的测定（比色法） 3.1 实验原理 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切联系。在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化。一次测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。 在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质。该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测量470nm处的吸光度变化速率来测定该过氧化物酶的活性。 3.2 实验试剂、仪器 仪器：分光光度计、研钵、恒温水浴锅、100ml容量瓶、吸管、高速冷冻离心机、秒表、磁力搅拌器 试剂：愈创木酚，30%过氧化氢，100mmol/L磷酸缓冲液PH 6.0， 反应混合液：取100mmol/L磷酸缓冲液（Ph6.0）50ml于烧杯中，加入28uL愈创木酚，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入19uL30%过氧化氢，混合均匀，保存于冰箱中备用。 3.3 实验步骤 （1）称取植物材料0.1g，剪碎，放入研钵中，加入适量预冷的磷酸缓冲液研磨成匀浆。残渣再用5mL磷酸缓冲液提取一次，合并两次匀浆，以4000rpm离心15min，上清液即为粗酶液，定容至10mL，储存备用。 （2）取3支试管，于1支中加入反映混合液3mL和磷酸缓冲液1mL，作为对照，另两支中分别加入反映混合液3mL和实验组酶液1mL、反映混合液3mL和对照组酶液1mL。迅速将3支试管中溶液混匀，倒入比色杯，置于分光光度计样品室内，立即开启秒表记录时间，于470nm处测定吸光度（OD）值，每隔10s读数一次。 （3）结果计算：以每分钟OD变化值[A470/(g FW·min)]表示酶活性大小，也可以用每分钟OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活性单位（U）表示。 过氧化物酶活性[U/(g FW·min)]=A470*VT/（W*VS*0.01*t） 式中： A470-----反应时间内OD变化值 V