色氨酸与TCBQ荧光性质的测定2.docVIP

L-色氨酸与四氯苯醌(TCBQ) 荷移荧光光谱法的研究 摘 要 本文使用荧光光谱法研究了L-色氨酸与四氯苯醌（TCBQ）的荷移反应。通过实验可得知，L-色氨酸与TCBQ在水中，以pH=10.9溶液，活性剂为代十六烷基吡啶溶液，在20℃的室温下加热10min以后，可生成稳定的荷移络合物。此荷移络合物的最大激发波长λmax=284，最大发射波长λmax=364，△F =0.32857+25.48571c (μg/mL）(R=0.99902),浓度在0~2.0μg/mL的范围内符合比尔定律，回收率在98.59～103.4%之内，相对标准偏差在0.96%以内, 该方法最低检测限为0.037μg/mL。 关键词 荧光猝灭法 L-色氨酸 四氯苯醌（TCBQ） 荷移反应 1 引言 L-色氨酸(L-trytophan)是人类和动物必需的八种氨基酸之一，化学名称为L-氨基吲哚基丙酸，别名L-胰化蛋白氨基酸、L-β-（3-吲哚基）-α-丙氨酸，它是含有吲哚基的芳香族氨基酸，呈白色或略带黄色的叶片状结晶或粉末，无臭有甜味，溶于热吡啶，微溶于乙醇，不溶于氯仿、乙醚，在稀酸或稀碱中溶解。L-色氨酸有促进机体生长发育，修补组织细胞的作用；有为肌体提供营养的作用；对肌体内各种酶、激素的分泌起调节的作用；提高肌体的免疫抵抗能力的作用；运输其它营养物质和解毒的作用。L-色氨酸系氨基酸类药物，对抑郁症、失眠症、高血压、及止痛等有良效，在欧美一些国家已广泛应用于临床[1]。 目前定量测定L-色氨酸的方法主要有高效液相色谱法[2-4]、电位滴定法[5]、原子吸收光谱法[6]、荧光光谱法[7,8]、分光光度法[9-11]、毛细管电泳分析法[12]、阻抑速差催化光度法[13]、线扫伏安法[14]、化学发光法[15-17]等。 利用与四氯苯醌（TCBQ）发生荷移反应测定L-色氨酸含量的方法还未见报道。本文选用TCBQ为电子接受体，研究了L-色氨酸与TCBQ形成荷移络合物的条件，探讨了反应机理，并对药物样品进行了含量测定，结果令人满意。 2 实验部分 2.1 主要仪器与试剂 仪器 LS55发光分光光度计（美国PE公司）；WGY-10型荧光分光光度计（）；） 2.2 溶液的配制方法 L-色氨酸溶液的配制：准确称取0.25000gL-色氨酸，用水溶解，转移到250mL的容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，配成1g/L的溶液。准确量取1ml 1g/L的L-色氨酸，用水溶解，转移到100mL的容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，配成0.01g/L的溶液。 pH=10.9的三酸缓冲溶液：分别取2.70mL磷酸、2.29mL冰醋酸、2.47g硼酸于1000mL容量瓶中并稀释至刻度，在酸度计下，用0.2mol/L的氢氧化钠调节至pH=。pH=10.9的三酸缓冲溶液pH=10.9的三酸缓冲溶液按照实验方法，用光度计Q的乙醇溶液，色氨酸溶液，色氨酸- TCBQ溶液进行激发和发射光谱扫描，负高压为140，光谱通带均为4nm。在nm～nm之间扫描。Q的激发值和荧光值都很低，对测定无干扰，色氨酸溶液的激发峰和发射峰分别为284 nm 和364 nm；加入TCBQ，峰高明显下降，而峰形和峰位都没有发生显著的变化。实验选择的激发波长为284 nm，发射波长为364nm。 图1 不同浓度下的发射光谱谱图 注释：从上至下谱线1~10分别如下： 1 – 色氨酸（.0mL） – 色氨酸（mL） – 色氨酸（.0mL）–BQ，4 – 色氨酸（.0mL）–BQ， 5 – 色氨酸（mL），6 – 色氨酸（0.mL）– 色氨酸（mL）– Q， 8 – 色氨酸（0.mL）– BQ，9 – 色氨酸（0.1mL– 色氨酸（0.1mL）–BQ 图2 不同浓度下的激发光谱谱图 注释：从上至下谱线1~10分别如下： 1 – 色氨酸（.0mL） – 色氨酸（.0mL） – 色氨酸（.0mL）– BQ，4 – 色氨酸（.0mL）–BQ， 5 – 色氨酸（mL），6 – 色氨酸（0.mL）– 色氨酸（mL）– BQ， 8 – 色氨酸（0.mL）– BQ，9 – 色氨酸（0.1mL– 色氨酸（0.1mL）– BQ 3.1.2 溶剂的影响 选用不同的溶剂按实验方法配制溶液，测定相应络合物的激发强度和发射强度并计算其猝灭量，结果（表1）表明，在乙醚、乙醇、乙腈、丙酮、二甲亚砜中试剂均有沉淀或分层现象，结果（表2）表明，溶剂用水和甲醇所得的结果差不多，但因考虑到甲醇有毒成本较贵，则本实验采用水为溶剂。 表1 溶剂的影响 溶剂 乙醚 乙醇 乙腈 甲醇 水 丙酮 二甲亚砜 现象 分层 淡粉沉淀 乳黄沉淀 溶液 溶液 白色沉淀 乳黄沉淀 表2