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菠萝蛋白酶药用功能及制药工艺的研究进展摘要：笔者查阅了大量的相关文献，简要介绍了菠萝蛋白酶的理化性质、药用功能，再重点介绍了菠萝蛋白酶已应用于工业的三种提取方法及处于研究阶段的新型提取、纯化方法。在此基础上，对菠萝蛋白酶的未来发展前景进行合理的预测。关键字：菠萝蛋白酶，提取，纯化　　菠萝蛋白酶（Bromelain,EC 3.4.22.3）简称菠萝酶，为重要的植物蛋白酶之一，在菠萝的各组织中广泛存在，1891 年 Mercaro 于菠萝的汁中首先发现。随后,人们对菠萝蛋白酶进行了一系列研究,发现这些蛋白酶不是单一的成分,而是由多种不同分子量和分子结构的酶系组成。菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，蛋白酶构成了菠萝蛋白酶的主要成分，根据分离提取的部位不同而分为茎酶和果酶，其中茎酶占 80%，果酶占 10%。磷酸酶、葡萄糖苷酶、过氧化物酶、纤维素酶、糖蛋白和碳水化合物等构成了其非蛋白酶组分。菠萝蛋白酶在临床和治疗中的作用已为人们所熟知，它在其它方面的效果也很显著，特别是对肿瘤生长的调控、三度烧伤和改善抗生素的作用方面疗效显著，也可以作为抗炎的口服治疗药物，治疗与血液凝固有关的疾病或恶性病。过去在临床上,大多数使用的是非单一成分的酶。虽然目前尚不能明确阐述各组分所起的作用,但它在临床应用的潜力正不断被挖掘。1.理化性质菠萝蛋白酶是作为单一多肽链而存在的，Anka Ritonja 等（1989）[1]通过Edman 降解法测定了羧甲基菠萝蛋白酶的氨基酸序列，发现其包含有 211 或 212个氨基酸残基，且参与酶蛋白组成的基本氨基酸种类齐全。这个较长形式的酶的分子量被计算为 22828，其中第 117 位残基是分子中唯一的糖基化位点，117~119残基分别是天门冬酰胺、谷氨酸、丝氨酸。在菠萝蛋白酶分子中，对其催化活性起关键作用的必需基团是巯基、氨基、色氨酸残基及组氨酸残基[2]。羧基、羟基和糖分子基团对酶活的影响不是很大[3]。因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。菠萝蛋白酶的分子量跨度大，等电点范围较广，茎酶中除 F9 不含糖外，其余组分都为含糖组分。菠萝蛋白酶 pH 在 4.0~5.5处于较稳定的状态，在中性环境中酶活保持最高，在偏酸环境下酶活下降较快，碱性环境能延缓失活[4]。菠萝蛋白酶处于不同 pH 条件下构象不同，在 pH2.0 时存在一个中间部分折叠。Sandeep Dave 等（2010）[5]用 10%~30%六氟异丙醇（HFIP）诱使茎酶发生中间部分折叠但只出现一个溶球状态特征的初步三级结构，不过此法可以诱使茎酶发生构象变化形成不同于天然酶蛋白的结构，使其具有有用的治疗特性。菠萝蛋白酶水解组织蛋白的活性较其它植物性蛋白酶略高。用菠萝蛋白酶对醇法大豆浓缩蛋白进行水解，水解度可达 11.07%[6]。菠萝蛋白酶基本无毒，对人进行大剂量口服（12g/d）治疗没有严重的副作用[7]。2.菠萝蛋白酶的药用功能菠萝蛋白酶是目前国内能够大规模生产的仅有的两种植物蛋白酶之一,虽然开发起步较木瓜蛋白酶晚,但随着人们对其认识的不断深入,其应用的领域也越来越广泛。菠萝蛋白酶在医学上应用多年,国内外许多专家学者对其药用功能做了深入的研究与探讨,下面对菠萝蛋白酶得到应用的药用功能做简要概述。2.1　免疫刺激,控制免疫反应　Brakebusch等(2001)[8]报道菠萝蛋白酶具有免疫刺激作用,并指出血液中丙种球蛋白缺乏症病人的吞噬细胞表现出对这种刺激特别敏感。Engwerda等(2001)[9]在体内外的研究结果表明,通过对辅助细胞的刺激作用和对T细胞的直接抑制反应,菠萝蛋白酶可以增强和抑制T细胞的免疫反应。2.2　抑制血小板聚集,加速纤维蛋白原的分解　菠萝蛋白酶能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风,缓解心绞痛症状,缓和动脉收缩,加速纤维蛋白原的分解。因此,它作为蛋白水解酶对心血管疾病的防治也是有益的。Metzig等(1999)[10]研究结果表明,菠萝蛋白酶在体外可以减少人体血小板聚集,减少血小板在牛内皮细胞的吸附和大鼠体内血栓的形成。这些结果解释了临床上使用菠萝蛋白酶治疗血栓及相关疾病的效果。2.3　抑制毒素分泌作用　试验结果证明菠萝蛋白酶能降低毒素结合活性并能抑制热不稳定毒素(LI)、霍乱毒素(CT)及热稳定毒素(ST)的分泌效应(章佩芬等,2002)[11]。2.4　激活炎症反应,具有消炎作用　对于免疫缺失的个体,菠萝蛋白酶具有激活炎症反应的潜力。有报道显示,菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿(包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤),能在体外激活鼠巨噬细胞(murine macrophages)和自然杀伤(NK)细胞(Engwerda等,