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金樱子多糖的分离纯化及药理作用研究进展 关键词：金樱子；多糖；分离；纯化；提取；药理 中药金樱子为蔷薇科蔷薇属的传统药食两用野生植物金樱子（Rosa laevigata Michx）的果实，始载于《蜀本草》，又名刺榆子、刺梨子、金罂子、山石榴、糖罐子等，我国分布广泛、资源丰富。《本草纲目》中记载金樱子：性酸、涩、平、无毒；主治脾泻下痢、止小便利、涩精气；久服，令人耐寒轻身，补血益精，有奇效[1]。现代研究表明，金樱子具有调节免疫、降糖降脂、抗炎抗菌等药理作用[2]，其有效成分主要为黄酮、三萜、乌索酸、齐墩果酸、多糖等[3]。本文就金樱子多糖的分离纯化以及药理作用进行综述。 1 金樱子多糖的提取 金樱子多糖为白色粉末，不溶于正丁醇、丙酮等有机溶剂，由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖组成[4]，果实中总糖含量约24 %，多糖含量达13.73%[5]。多糖分子结构中羟基较多、极性大，因此通常采用不同温度的水、稀碱溶液或稀酸溶液提取，常用的方法有：溶剂法、微波法和酶法。 1.1溶剂法 为植物多糖提取的常用方法。多糖极性大，根据相似相溶原则，可采用水等强极性溶剂提取。由于采用碱或稀酸水溶液提取多糖，容易破坏糖苷键及水解多糖链上的基团如硫酸酯基、磷酸酯基等，因此金樱子多糖提取的溶剂法常采用水提醇沉法。王瑞兰等[6]将金樱子干燥，粉碎，用无水乙醇与无水乙醚混合液（体积比为1:l）浸泡12h去脂，布氏漏斗抽滤，滤渣风干后用80℃左右热水浸提3次，每次5h，合并提取液，浓缩，用sevag法脱蛋白，H2O2脱色，透析，旋转蒸发浓缩，加人4倍体积的95%的乙醇沉淀过夜，离心，沉淀物连续用无水乙醇和丙酮洗涤，冷冻干燥得近似金黄色金樱子粗多糖。 1.2微波法 微波是频率介于300MHz-300GHz之间的电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部。由于溶剂及细胞液吸收微波能，细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。此法提取时间短提取率高。薛梅等[7]使用石油醚脱脂后，辅以微波用乙醇提取金樱子黄酮，去黄酮后挥干剩余物的乙醇，继辅以微波，水回流提取、浓缩，得金樱子多糖。 1.3其他提取法 植物多糖还有多种尚未用于金樱子多糖的提取方法。如酶法、超滤法、超声法。以上方法各有优势，酶技术是近年来广泛应用的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，比较温和的分解植物组织，加速多糖的释放或提取；超滤法所采用的超滤膜能够从水中分离出多糖分子，具有浓缩条件温和，多糖损失小，速度快，节约能源，浓缩的同时可除去小分子杂质和色素等优点；超声法是应用超声波强化提取植物多糖的方法，具有缩短提取时间，提高提取率等优点，目前已应用于南瓜总糖、还原糖和多糖、海带多糖、甘草多糖、海藻多糖的提取。 2 金樱子多糖的纯化 多糖中常含有无机盐、大分子蛋白质、木质素、色素及醇不溶物的小分子有机物，提取过程中常用使用Sevag法，三氟三氯乙烷法，三氯乙酸法，酶法，等电点沉淀法去除杂质[8]。此外，通过上述方法所得到的是多糖混合物，如果要得到单一的多糖，还必须对该混合物进行纯化。常用的纯化方法有：分级沉淀法，季铵盐沉淀法，层析法，盐析法等[8].。 柱层析在多糖的纯化较为常用，常分为两类：一是只有分子筛作用的凝胶柱层析，它根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的，常用的凝胶有葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶，以及性能更佳的Sephacryl等。洗脱剂为各种浓度的盐溶液及缓冲液，其离子强度不应低于0.02mol／L。二是离子交换层析，它不仅根据分子极性的不同，同时也具有分子筛的作用，常用的交换剂有DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖和DEAE-琼脂糖等，此法适合于分离各种酸性，中性多糖和粘多糖。多糖的纯化还可用其他方法，如制备性高效液相层析、制备性区带电泳，亲和层析等，这些方法适用于制备少量纯品供分析用。多糖的检测可用比旋度、示差折射及紫外检测等方法，也可以用苯酚－硫酸法测定多糖。纯度的鉴定可以用超离心法、高压电泳法、凝胶过滤法、高效液相法、示差折射法、紫外检测法等。 王瑞兰等[6] 制备性高效液相层析分离纯化金樱子多糖，其方法是：通过DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析，盐梯度洗脱，用苯酚一硫酸法检测。收集到2个洗脱曲线主峰的多糖组分，经检测分子量分别为22712和16051，其中之一由D-半乳糖、D-甘露糖和木糖组成。 3 金樱子多糖的药理作用 植物多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等有着密切的关系。此外它还能控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老等[9]。目前，对多糖的化学研究以及生物功能的