生物化学第34章DNA及复制和修复.ppt

第34章 DNA的复制和修复 一、DNA的复制 DNA复制的三种可能模式 Watson和Crick提出的DNA双螺旋复制模型 DNA半保留复制的实验证明 DNA半保留复制的实验证明 The Meselson-Stahl experiment （二）DNA复制的起点和方式 DNA复制的方向 DNA复制的方向 中国仓鼠卵巢细胞DNA复制的电镜照片 各种生物DNA的结构 DNA上复制子的数目 复制起始点的确定 大肠杆菌染色体DNA复制起始点的确定 DNA的复制方式 DNA的复制方式 DNA的复制方式 DNA的复制方式 大肠杆菌的多复制叉染色体 DNA酶促合成的引物链和模板链 （三）DNA聚合反应有关的酶 DNA聚合酶催化的聚合反应 DNA聚合酶的反应特点 大肠杆菌DNA聚合酶 The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1959 The Nobel Prize in Chemistry 2006 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段 Klenow片段的立体结构 Klenow片段的活性位点 DNA聚合酶Ⅰ的校对作用 DNA聚合酶Ⅰ的切口平移作用 关于大肠杆菌DNA聚合酶的研究 大肠杆菌中3种DNA聚合酶性质的比较 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构 β二聚体的滑动夹子结构 DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ DNA连接酶 DNA的连接类型 （四）DNA的半不连续复制 DNA复制叉处的前导链和滞后链 冈崎片段的发现 原核生物和真核生物的冈崎片段 DNA复制中的引物 （六）DNA复制的过程 DNA复制时涉及的部分酶和蛋白质 拓扑异构酶 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 旋转酶的作用机制 解旋酶（helicase） DnaB蛋白 单链DNA结合蛋白 大肠杆菌染色体oriC的结构 DNA复制的起始Ⅰ DNA复制的起始Ⅱ DNA复制的起始Ⅲ DNA复制体的装配Ⅰ DNA复制体的装配Ⅱ DNA复制体的装配Ⅲ 岗琦片段的连接 DNA连接酶催化的反应 DNA复制叉的延伸 DNA复制的终止 DNA复制的终止 （七）真核生物DNA的复制 真核生物的复制子 真核DNA的复制速度 哺乳动物的DNA聚合酶 细菌和真核生物复制体的组成 PCNA同源三聚体夹子 真核染色体末端的复制 真核染色体末端的复制 端粒酶（telomerase） 新生链5’端的短缺和端粒酶延长端粒的功能 真核染色体端粒的延长 细胞的寿命与端粒的关系 二、DNA的损伤修复 DNA损伤修复的种类 （一）错配修复 错配修复 错配修复 DNA的甲基化 错配修复(寻找切割位点) 错配修复(寻找切割位点) 错配修复（切除和合成） （二）直接修复 嘧啶二聚体的结构 嘧啶二聚体的光复活 O6-甲基鸟嘌呤的修复 （三）切除修复 切除修复 （四）重组修复 DNA重组 重组修复 （五）应急反应（SOS）和易错修复 SOS反应的机制 易错修复 三、DNA的突变 （一）突变的类型 （二）诱变剂的作用 交换点 交叉 着丝点 复制 重组 修复 ｝异常子代双链 ｝正常子代双链 ｝异常亲代双链 许多造成DNA损伤或抑制复制的处理均能引起一系列复杂的诱导效应，称为应急反应（SOS response）。SOS反应包括诱导DNA损伤修复、诱变效应、细胞分裂的抑制以及溶原性细菌释放噬菌体等。 RecA蛋白在有单链DNA和ATP存在时被激活，然后促进LexA的自身水解酶活性，使得LexA自我降解，导致许多受LexA抑制的基因表达。 Leading strand “core” DNA polymerase Ⅲ τ2 SSB γ Rep protein Leading Lagging strand strand 1st RNA primer Lagging strand “core” DNA polymerase Ⅲ 3rd RNA primer (most recent) Primosome Helicase Ⅱ 2nd RNA primer Growing Okazaki fragment Ter位点是一个20bp的短序列，其中含有一个保守核心GTGTGTTGT，Tus蛋白与Ter位点结合后起终止复制叉前进的作用。 DNA topoisomerase Ⅳ 真核生物染色体有多个复制起始点。 5-氟脱氧尿苷是细胞内胸腺嘧啶核苷酸合成的抑制剂，用5-氟脱氧尿苷处理真核生物的培养细胞可以抑制DNA复制，随后加入3H-脱氧胸苷就可以使DNA复制同步化。复制进行大约30分钟，然后制成DNA的放射自显影图像，在电子显微镜下观察，可以看到很多复制眼，每个复制眼都有独立的起点，并呈双向延伸。通过测量和换算，可以估