第二章菌种及选育.pptVIP

第二章菌种的选育; 内 容 1.菌种的来源 2. 菌种的选育 3. 菌种的保藏;2.1 菌种的来源 微生物具有的五大特性 1.种类多,分布广; 2.比面积大,代谢能力强; 3.生长迅速,繁殖快; 4.适应性强,容易培养; 5.易变异.;2.1.1生物物质产生菌的筛选 2.1.1.1微生物---生物产物的来源 两个成功因素;2.1.1.2 待筛选样品的性质;2.1.1.3 筛选方案的设计 三种基本的筛选方法： 整体生物； 2. 完整细胞； 3. 亚细胞制剂;举例1： 抗细菌的筛选—琼脂扩散法： 1.试验菌的制备;2.琼脂板制备;4.琼脂板鉴定;;方法建立： 1.λ噬菌体诱导检测系统：当大肠杆菌溶素原受阻遏状态下的λ原噬菌体因DNA的损伤而释放出来，通过平板法检测完整噬菌体颗粒的生长情况可作出DNA受损情况判断。;2.生化诱导BIA法;分析步骤(BIA);;2.1.2 微生物选择分离的原理和发展;（1）确定研究目标，了解微生物资源状况；;采样时要注意的问题; ;2.1.2.2材料的预处理;2.1.2.3 所需菌种的分离; 采用给混合菌群提供一些有利于所需菌种或不利于其它菌型生长条件以促使所需菌株大量繁殖，从而利于分离它们，所谓的增殖培养。;富集的三种方案：;定向培养的富集方法;2.1.2.4 菌种的培养 应该注意：各种菌种的培养条件和时间也各不相同。 2.1.2.5菌落的选择 1.铺菌法；2.复印平板法。; 从形态的角度; 从产物角度出发;2.2 工业化菌种的要求;2.3 施加选择压力的分离方法 1.富集液体培养法: 连续培养菌种的筛选 比生长速率(u):每克菌体每小时增长的菌体量.u=1/XdX/dt.;比生长速率u;限制性基质;2.固体培养基的使用 主要适用于初级代谢产物菌株的筛选;实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选（国家七五攻关项目）;2.4 随机分离方法 1.抗生素产生菌筛选 2.药理活性化合物的筛选 3.生长因子产生菌的筛选 4.多糖生产菌的筛选;2.4 菌种选育 目的:;2.4.1自然选育 自然选育:在生产过程中,不经过人工处理,利用菌种的自然突变而进行菌种的筛选的过程.;自然选育在工业生产上的意义;自然选育操作步骤： ;2.4.2 诱变育种;2.4.2.1 诱变育种的一般步骤见 (p38) 整个流程主要包括:诱变和筛选. 诱变育种中的几个注意问题 1.出发菌株的选择 出发菌株标准:产量高、对诱变剂的敏感性大、变异幅度大。; 待处理的菌悬液应考虑微生物的生理状态、悬液的均一性和环境条件。一般要求菌体处于对数生长期，并采取一定的措施促使细胞处于同步生长,这样有利于变异率提高得到很好的重现性。 ;2.复合诱变因素的使用 出发菌株通常有三种: 从自然界分离得到的野生型; 通过生产选育的菌株即自发突变选育 已经通过诱变选育的菌株. 对于不同出发菌株考虑采用不同的诱变剂进行处理;3.剂量的选择 变异率与致死率有一定的关系,利用致死率作为剂量选择的依据. 4. 变异菌株的筛选 初筛: 总结变异的菌落“形态”特性和产量之间的关系.;根据平皿反应直接挑取高产菌株: 平皿反应:每个菌落产生的代谢产物与培养基的指示物作用后的变色圈和抑制圈等等. 常用方法:纸片培养显色法、透明圈法、琼脂片法、浓度梯度法等等。;以上为产量型的筛选 营养缺陷型的筛选： 经过诱变后，经过中间培养，淘汰野生型、检出营养缺陷型确定生长谱。 淘汰野生型的方法有：抗生素法、菌丝过滤法、差别杀菌法和饥饿法等，其目的是浓缩营养缺陷型。 营养缺陷型检查方法：逐个测定法、夹层平板法、限量营养法等等。;5.高产菌株的获得与筛选条件的配合 出发菌株、诱变因素、筛选条件;2. 快中子 快中子的生物学效应是由其撞击原子核后产生的质子产生的。 能够引起较多的点突变和染色体变，而产生诱变育种的效应。;3.氮芥(p40) 机理：氮芥的盐酸盐和碳酸氢钠反应释放出氮芥子气，再与细胞作用引起染色体发生畸变。 使用方法： 活化剂和解毒剂的配置 氮芥的盐酸盐配置 诱变作用 诱变终止;4.亚硝酸 作用机制：脱去碱基中的氨基，引起碱基对的转换作用从而造成突变。 5.N-甲基-N/-亚基胍（NTG) 对DNA起到烷化剂和亚硝酸的作用。 6.航天育种 利用空间高真空、微重力和强辐射的特点;2.5 抗