第四章 蛋白类酶及分离纯化.ppt

第四章 酶的分离纯化 1、酶分离纯化的原因（3条） 2、酶分离纯化鉴定的依据－蛋白质的物理化学特性（9条） 内 容 1、酶的提取与分离纯化技术路线 2、细胞破碎 3、酶的提取 4、酶的分离方法 5、酶的组合分离纯化策略 6、酶的浓缩、干燥与结晶 酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。 酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质，选择适当的溶剂。一般说来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性的有机溶剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。 酶都能溶解于水，通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取，有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团，则可用有机溶剂提取。 提高温度，降低溶液粘度、增加扩散面积、縮短扩散距离，增大浓度差等都有利于提高酶分子的扩散速度，从而增大提取效果。 为了提高酶的提取率并防止酶的变性失活，在提取过程中还要注意控制好温度、pH值等提取条件。 为了使蛋白质充分溶解并保持蛋白质的结构与活性，蛋白质提取缓冲液常包含的成分 控制溶液pH值的缓冲对； 控制溶液离子强度的无机盐； 控制溶液氧化还原状态的还原剂； 蛋白酶抑制剂 离子螯合剂 标准牛血清白蛋白 去污剂 水和防腐剂 甘油 大多数蛋白类酶都溶于水，而且在低浓度的盐存在的条件下，酶的溶解度随盐浓度的升高而