第四章酶及分离纯化.ppt

第三章 酶的分离纯化与保存 酶的分离纯化是酶学研究的重要环节之一。 针对化学本质是蛋白质的酶而言，其分离纯化的方法主要沿用蛋白质分离提纯的方法。 酶的分离纯化又有其自身特点： 难点：目标酶在细胞中含量少 优势：可通过测定酶活性的方法进行示踪 酶的分离纯化是一门实验科学 酶的分离纯化，就是将酶从细胞或者其他含酶的原料中释放出来，再与杂质分开，而获得符合研究和使用要求的酶制品的过程 胞内酶：在细胞中，酶在核糖体上合成后，即转运到各个作用部位，并不断补充和更新 胞外酶：合成后穿过质膜，定域到质膜外表面、周质空间、外膜及细胞外环境中的酶 不同的酶分离纯化的方法不同：胞内产物需经细胞破碎，细胞碎片分离等步骤；胞外产物则将细胞去除后，对余下的液体即可进行初步纯化 选用技术前，需考虑： 1.目标酶分子特性及其他物理、化学性质 2.酶分子和杂质的主要性质差异 3.酶的使用目的和要求 4.技术实施的难易程度 5.分离成本的高低 6.是否造成环境污染 主要过程： 细胞破碎 ? 酶的提取 ? 离心分离 ? 过滤? 沉淀? 层析? 电泳? 萃取?浓缩?干燥? 结晶? 保存。。。 一、酶分子制备的前处理 1、生物材料的选择 选择目的酶含量高的 选择容易取材的 利用细胞培养技术和基因工程重组DNA技术。 目前，酶的来源大都为来自微生物 材料选定后要尽可能保持新鲜，尽快加工处