一株产高温蛋白酶耐热菌BY25的产酶条件与酶学性质研究.PDFVIP

土 壤 (Soils), 2010, 42 (3): 329410~414 ① 一株产高温蛋白酶耐热菌 BY25 的产酶条件与酶学性质研究 1,2,3 1,2* 1,2,3 彭素萍 ， 林先贵 ， 王一明 （1 土壤与农业可持续发展国家重点实验室（中国科学院南京土壤研究所），南京 210008;； 2 中国科学院南京土壤研究所-香港浸会 大学土壤与环境联合开放实验室，南京 210008;； 3 中国科学院研究生院，北京 100049 ） 摘 要： 对菌株 BY25 的生长条件、产酶条件及其产生的蛋白酶的酶学性质进行了研究。结果发现，BY25 的最高生长温 度为 55℃，最适生长温度为 50℃，最佳产酶温度为 30℃，最佳培养起始pH 为 8.0，最佳 C 源为葡萄糖，高通气量明显提高菌 株产酶能力。在以上条件下培养 52 h，上清液蛋白酶活力达4 170 U/ml 。酶学性质研究表明：该蛋白酶为高温中性金属蛋白酶， 最适反应 pH 为 7.0，最适反应温度为 55℃，具有良好的pH 耐受性和较好的热稳定性；EDTA 能强烈抑制酶活力，而 Fe2+ 、Cu2+ 对酶活力也具有一定抑制作用。 关键词： 高温蛋白酶；产酶条件；酶学性质 中图分类号： Q93 蛋白酶是一类重要的水解酶，其产量约占工业酶 - [1 2] ，广泛应用于食品、医药、洗 1.2 培养基 总产量的 60% 以上 涤剂、纺织及皮革处理等方面。高温中性蛋白酶具有 1.2.1 LB 培养基（g/L ） 蛋白胨 10 ，酵母膏 5， 良好的热稳定性，能够弥补普通中性蛋白酶的不足， NaCl 5 ，pH 7.2 。 [3] 脱脂牛奶 10 ，酵母 具有广阔应用前景。应用上，高温蛋白酶更优于常温 1.2.2 牛奶培养基（g/L ） 蛋白酶。在高温下，产物被常见的常温微生物污染的 膏 2.5 ，pH 自然。 [4] 葡萄糖 60 ，豆 机率降低；反应液的黏度降低，底物的溶解度、生物 1.2.3 基础发酵培养基（g/L ） 饼粉 30 ，麸皮 40 ，Na HPO 4 ，MgSO •H O 0.2，CaCl 可利用性增加，加快了反应速率。 2 4 4 2 2 此外，对蛋白酶耐热机理的研究，将促进蛋白质 0.2，pH 7.0 。 工程的发展。可以为改造具有重要商业价值的天然酶， 1.3 酶活力测定 提高其稳定性提供理论依据。20 世纪 70 年代以来， 采用 Folin 显色法[5] 。将培养液离心取上清，以适 高温中性蛋白酶已成为酶学研究领域的热点之一。微 当pH 缓冲液稀释后，取 20