糖基化磷脂酰肌醇锚定型EGFP真核表达质粒的构建及表达-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 11期 糖基化磷脂酰肌醇锚定型 EGFP真核 表达质粒的构建及表达 郭荫广1 陈全2 朱大冕1 ( 1 2 ) 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心 ,重庆 4000 16; 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室 ,重庆 400016 ( ) 　　摘 　要 : 　构建与增强型绿色荧光蛋白基因相连的糖基化磷脂酰肌醇 glyco syl pho sphatidylino sito l, GP I 序列的真核表达 质粒 ,并检测其在 A 549细胞中的表达 。分离人外周血淋巴细胞 ,提取总 RNA , 以 R TPCR 法扩增 CD24 基因的 243 bp GP I锚 定序列 ,双酶切后定向克隆入 p EGFPC1质粒中 ,构建并鉴定 p EGFPC1GP I质粒 。经脂质体介导转染 A 549细胞后 ,在荧光显 微镜下观察 目的蛋白在真核细胞 内的表达情况 。经酶切和测序鉴定证实 ,所克隆的 CD24 GP I序列正确 ,荧光显微镜观察 p EGFPC1GP I质粒转染 A 549细胞可见围绕细胞膜的强绿色荧光 ,而对照 p EGFPC1质粒转染 A 549细胞仅见胞内均匀荧光 。 成功构建与 EGFP相连的 GP I真核表达质粒 ,且能在 A 549细胞膜上锚定表达 EGFPGP I融合蛋白,为构建锚定表达型肿瘤疫 苗奠定基础 。 关键词 : 　GP I 真核表达载体 A 549 绿色荧光蛋白 Con struction of Eukaryotic Expression Pla sm id of GP Ianchored EGFP and Its Expression in A549 Cells 1 2 1 Guo Yinguang 　Chen Quan Zhu D am ian 1 2 ( Chong qing M ed ica l Un iversity, Chongqing 400016; D ep a rtm en t of Imm unology, Colleg e of P reclin ica l M ed icine, Chongqing M ed ica l Un iversity, Chong qing 4000 16) 　　Ab s tra c t: 　It was to con struct a eukaryotic exp ression p la sm id of CD24 GP I gene linked w ith EGFP gene at itsN term inal, and ob