柠檬酸钠促进S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联合高产-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（８）：４９５４ 柠檬酸钠促进 Ｓ腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联合高产  王玉磊　朱　健　卫功元 　许宏庆　汪成富 （苏州大学医学部基础医学与生物科学学院　苏州　２１５１２３） 摘要　考察了柠檬酸钠对Ｓ腺苷蛋氨酸（ＳＡＭ）和谷胱甘肽（ＧＳＨ）联产发酵的影响，发现柠檬酸 钠有利于ＳＡＭ和ＧＳＨ的联合高产。采用响应面分析法对柠檬酸钠浓度及其添加时间进行优化， 模型预测和验证实验结果均表明在联产发酵６ｈ时一次性添加 １０ｇ／Ｌ柠檬酸钠的效果最佳。通 过对ＳＡＭ和ＧＳＨ联产发酵过程进行分析，发现柠檬酸钠能够显著提高胞内ＮＡＤＨ和ＡＴＰ的水 平，为ＳＡＭ和 ＧＳＨ的过量合成提供了足够的能量物质，也为类似耗能化合物的生物合成及其发 酵高产提供了可行的优化策略。 关键词　Ｓ腺苷蛋氨酸　谷胱甘肽　ＡＴＰ　联产发酵　柠檬酸钠 中图分类号　ＴＱ４６４．７　Ｑ９３９．９７ ［１０］ 　　Ｓ腺苷蛋氨酸（ＳＡＭ）和谷胱甘肽（ＧＳＨ）是生物体 谢物质的生物合成提供充足的ＡＴＰ 。柠檬酸钠是一 内两种重要的含硫生物活性小分子化合物。ＳＡＭ在临 种廉价的化学物质，经好氧微生物代谢后可以提高胞 ［１］ 床上常用于肝病、关节炎和抑郁症的治疗 ，ＧＳＨ在临 内ＡＴＰ的含量，进而增强细胞抵抗酸胁迫环境的能 床医学、运动保健、食品加工等诸多领域也都有着广泛 力［１１１２］。基于此，本文考察柠檬酸钠添加对产朊假丝 ［２］ 的应用前景 。 酵母发酵联产ＳＡＭ和ＧＳＨ的影响，同时采用数学统计 　　酵母发酵法被认为是 ＳＡＭ和ＧＳＨ生物合成的最 方法探寻合适的添加方式，从能量代谢和动力学等角 ［２４］ 度对发酵结果进行分析，并对柠檬酸钠促进 ＳＡＭ和 有潜力的方法 。由于ＳＡＭ和ＧＳＨ在酵母细胞中均 ［５］ ＧＳＨ过量合成的机理进行解释。 为Ｌ蛋氨酸代谢途径中的关键节点物质 ，因此可以 通过合适的菌种选育方法获得 ＳＡＭ和ＧＳＨ联产的酵 １　材料与方法 ［６］ 母菌株 。ＳＡＭ和ＧＳＨ的生物合成都需要 ＡＴＰ的参 与，胞内ＡＴＰ的水平决定着底物的转化效率以及 ＳＡＭ １．１　材　料 ［７］ １．１．１　菌株　产朊假丝酵母（ＣａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓＣＣＴＣＣＭ 和ＧＳＨ能否高效合成 。相关研究也表明，适时向发 酵液中添加适当浓度的外源ＡＴＰ可以有效地促进ＧＳＨ ２０９２９８）。 ［８］ １．１．２　培养基　种子培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖２０，蛋白胨 产量的提高 ，但 ＡＴＰ价格昂贵，外源添加 ＡＴＰ显然 会大幅提高生产成本。因此，若能寻找到一种可替代 １０，酵母膏１０，ｐＨ６．０。 ＡＴＰ的廉价物质，则对于ＳＡＭ和ＧＳＨ的过量合成，乃 　　发酵培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖３５，硫酸铵 １０，磷酸二 至ＳＡＭ和ＧＳＨ的产业化生产无疑都具有重要意义。 氢钾１２．３，Ｌ蛋氨酸４．６，硫酸镁０．０５，氯化钙０．０５，ｐＨ 　　近年来，研究发现酵母细胞可以利用外源添加的 ５．５。柠檬酸钠添加时间和浓度根据实验要求确定。 辅助性能源物质，如柠檬酸盐、甲酸盐等，有效地提高 １．１．３　试剂及仪器　ＮＡＤＨ、ＡＴＰ、谷胱甘肽还原酶、 ［９］