试验一显微镜的构造和使用方法-长沙医学院.DOC

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试验一显微镜的构造和使用方法-长沙医学院

长 沙 医 学 院 教 案 课程名称 分子生物学 授课题目(章节或主题) 实验一 碱裂解法提取质粒DNA 授课教师 陈珂珂 所属系(部) 基础系 所属教研室 生物教研室 职称 助教 授课时间 年 月 日 第 周 星期 第 节 第二次课 授课时数 4学时 授课班级 临生物技术专业(本科√ 专科□) 2010级 1班 教学课型 理论课□ 实验课√ 见习课□ 习题课□ 讨论课□ 其它□ 教材名称、作者、出版社及出版时间 分子生物学及基因工程实验教程、刘箭、科学出版社、2012 教学目的要求: 采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术 碱裂解法的关键是如何把握SDS-NaOH处理的时间。质粒制备过程中,如果质粒长时间暴露于NaOH,质粒有可能不可逆变性,使得抽提质粒中有部分是变性质粒。这些变性质粒,不能酶切。所有一般情况下,SDS-KOH处理时间不能超过5分钟,最好在冰里处理,观察到液体变得清就可以加入中和液。碱裂解法的关键是如何把握SDS-NaOH处理的时间。质粒制备过程中,如果质粒长时间暴露于NaOH,质粒有可能不可逆变性,使得抽提质粒中有部分是变性质粒。这些变性质粒,不能酶切。所有一般情况下,SDS-KOH处理时间不能超过5分钟,最好在冰里处理,观察到液体变得清就可以加入中和液。

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