蔗糖酶米氏常数及.pptVIP

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2017-10-03 发布于浙江
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蔗糖酶米氏常数及.ppt

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蔗糖酶米氏常数及

蔗糖酶米氏常数的测定 * 【目的】：了解底物浓度与酶反应速度间的关系，学习求蔗糖酶米氏常数的方法【原理】：米氏方程式 v = Vmax[S] Km +[S] 式中，Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数。米氏常数的求法很多，最常用的是LineweaVer—Burk的作图法(双倒数作图法)。将米氏方程式改写为下列倒数形式： 1／V=Km／Vmax·1／[S]+1／Vmax 实验时，选择不同的[s]，测定相应的v，求出两者的倒数，以1/[s]为横坐标，以1/υ吉为纵坐标作图，绘出一条直线，外推至横轴相交，横轴截距即为-1/Km。【仪器与试剂】 1. 仪器：分光光度计、恒温水浴、试管、吸管、秒表、坐标纸 2．试剂标准葡萄糖溶液（1mg/ml）、 0.2 mol／L蔗糖溶液、 0.2 mol／L NaAc缓冲溶液(pH4.6)、０.1mol／L NaOH溶液 3，5一二硝基水杨酸试剂。【操作步骤】 1．葡萄糖标准曲线的制定 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3,5—二硝基水杨酸试剂/ml 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 相当葡萄糖量/mg 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 葡萄糖标准液/ml 5 4 3 2 1 0 管号将各管溶液混合均匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温，以蒸馏水稀释至25ml，摇匀。测540nm处A值。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，A值为纵坐标作出标准曲线。 *