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4.33 单克隆抗体的改造和应用 单抗作为体内体外诊断试剂在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等 单克隆抗体靶向制剂，治疗癌症等疾病 杂交人－鼠单克隆抗体 1 单抗作为体内体外诊断试剂 现在已经有各种不同类型的单抗试剂合在市场出售，例如乙型肝炎的表面抗原，铁蛋白、促绒毛膜性激素、促甲状腺激素、癌症、艾滋病等诊断试剂。 用同位素标记的单抗在特定的组织中成象的技术可以用于肿瘤、心血管畸形的体内诊断。 2 单克隆抗体靶向制剂 1）药物与单抗直接偶联 通过化学反应使药物分子的氨基与抗体分子的羧基之间直接形成稳定的酰胺键。 利用氧化剂把药物分子上的糖基氧化成羰基。 利用羰基与抗体分子的氨基反应形成西佛氏碱，最后还原。 这样的靶向制剂保留一定的药物活性，并具有一定的选择性。 如：1，4－溴柔红霉素与肿瘤细胞单抗形成的偶合物，对肿瘤有明显的选择性毒性。 2）药物通过小分子与单抗连接 通过一些小分子交联剂，把药物分子上的某些基团连接起来。 小分子交联剂：如同型双功能试剂，包括戊二醛、顺乌头酸酐、马来酸酐、戊二酐；异型双功能试剂：N－琥珀酰胺基－3－丙酸和寡肽等。 顺乌头酸酐制成的最常用，在中性条件下较稳定，在酸性条件下容易发生水解。这种靶向试剂与肿瘤的表面抗原结合后，会进入溶酶体，在酸性环境下释放药物，而杀死肿瘤细胞。 3）药物通过大分子与抗体相连 大分子聚合物：葡聚糖、多聚赖氨酸、多聚谷氨酸、聚合多肽和血清蛋白等。 总之，利用单抗试剂合可以作为靶向药物，针对肿瘤、自身免疫系统疾病、各种病原体病等。 3、杂交人－鼠单克隆抗体 chimeric 鼠源抗体一般无法有效地激发宿主的免疫防卫系统，还可能引发人对鼠源抗体本身的免疫反应。 在抗体中，Fc片段在抗体中的作用是激活机体免疫反应。对鼠源抗体进行改造，利用人源的Fc区域的DNA片段替换鼠源单抗的Fc的DNA片段。嵌合抗体可以保留其目标专一性，降低人的抗鼠反应。 4、人源单克隆抗体 低免疫原性、高效性 方法1：分离人B细胞，使之与荧光标记的抗原相结合，通过荧光标记选择能产生特殊抗体的B细胞，并用Epstein－Barr病毒转化，得到少量的单抗。 方法2：将人源免疫干细胞导入缺失大部分免疫细胞的小鼠体内，遇到抗原时，产生人源的抗体。 方法3：将改造过的人的抗体基因导入鼠胚胎中，能在免疫后得到产生人抗体的转基因鼠。 5、抗体融合蛋白 将抗体的可变区与一非抗体蛋白融合起来，使融合蛋白继承有抗体分子的结合特异性。可以保留不同程度的抗体结合特异性和激发其他免疫反应的能力。 6、抗体酶 结合了酶与抗体的优点，既可以起酶促催化作用，又可以起抗体的选择性和专一性结合抗原的作用。 制备抗体酶的方法： 1）利用与过渡态结构相类似的半抗原通过杂交瘤技术生产抗体酶。 2）利用定向催化，即利用抗体的特异性和亲和性使催化反应的两种底物按一定的构象结合并定向，从而降低底物分子的自由度，反应速度加快。 3）对抗体进行化学修饰，使抗体与催化基团相连。 7、单链抗体 在大肠杆菌的系统中，可以表达VL－衔接物－VH的序列，产生单链抗体。 单链FV片段:抗体体积小、免疫原性较低，渗透性好，用于实体肿瘤的诊断和治疗。 生物导弹：利用单链抗体序列接上一段药物蛋白的编码序列，表达后的蛋白可以根据抗原抗体反应，而达到专一性治疗疾病的目的。 双功能抗体片段：两个抗原结合特异性不同的Fab或Fv片段通过二硫键连接起来，如一个结合肿瘤特异性抗原，一个结合杀伤性T细胞，这样识别和消灭肿瘤细胞的功能可以统一在一个单链抗体分子上。 单克隆抗体在现代医学中的应用 单克隆抗体具有高度的特异性与灵敏性，可以广泛地由于临床医学的疾病诊断，以提高疾病诊断的准确性。 利用单克隆抗体技术可以生产各种免疫疫苗，这不仅能大大降低生产成本，同时也增加了疫苗的安全性。 单克隆抗体还有可能用于某些肿瘤的治疗，是人类战胜癌症十分有望的潜在技术。 单克隆抗体技术还可广泛用于各种基础医学研究，从而推动现代医学的不断发展。 思考题 1 简述McAb制备过程及主要原理。 2 为什麽要对鼠源性McAb进行改造使之人源化？ 3 制备单抗靶向制剂的主要方法有哪些？单抗靶向制剂有何实际意义？ 4 简述利用细胞工程制备人源性McAb的方法有哪些？它们的优势与难点如何？ * Our natural defenses against these infectious agents are antibodies, proteins that seek out the antigens and help to destroy them. Antibodies have two very useful characteristics. First, they are extremely s