十植物花药与胚胎培养.ppt

2010-11-30 第十一章 植物花药与胚胎培养 第一节 花药与花粉培养 花药和花粉培养：指在合成培养基上，改变花粉的发育途径，使其不形成配子体，而象体细胞一样进行分裂、分化，最终发育成完整植株。该发育途径被称为“花粉孢子体发育途径”或“雄核发育”。 花药和花粉培养的异同点 培养目的相同，均获得小孢子植株，即单倍体植株。 花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培养。 花粉培养： 没有药壁组织干扰，可计数小孢子产胚率； 可观察雄核发育的全过程； 单倍体产量高。 但技术更复杂。 二、花药与花粉培养的用途 1、作物育种中的应用 缩短育种周期：常规育种需4-6年获得纯系，而小孢子培养仅需一年。 提高目标基因型的选择效率 例子：二倍体供体植株基因型为AaBb，从后代中选择基因为AAbb的纯合单株。 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。 单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。 诱变育种中的作用 植株不受显隐性的影响，在诱变育种中能在当代及时获得突变个体，加倍后成为稳定的纯系。 远缘杂交育种中的作用 克服远缘杂交后代性状分离严重、性状很难稳定的问题，通过单倍体育种，容易获得稳定的远缘杂种后代。 2. 在转基因技术中的应用 在转基因技术中，如果把单倍体细胞用作受体，然后加倍成为二倍体，可以获得稳定的转基因植物，避免外源基因在转基因植物后代中的分离和丢失。 三、植物小孢子发育过程 初生造孢细胞经过多次分裂产生小孢子母细胞。 第二期：四分体分离开后，单个小孢子继续发育。 起初小孢子为薄壁球形细胞，细胞核大而圆，位于细胞中央。--单核早期 随后，细胞质中出现液泡，液泡逐渐变大，细胞核被挤压到一边，细胞由球形变为纺锤形，这一时期称为单核靠边期。--单核中期 到第二期末，进行第一次有丝分裂。--单核晚期 第三期：小孢子发育成为成熟的花粉粒。 花粉细胞有丝分裂形成一个生殖细胞和一个营养细胞。当细胞中明显出现两个核时，表明进入第三期。 小孢子从产生生殖细胞开始，称为配子体。 在第三期的一定阶段，生殖细胞逐渐进入营养细胞的细胞质中，营养细胞的液泡开始分散，以至消失。 两细胞花粉与三细胞花粉： 一些植物的生殖核停留在分裂前期或分裂前中期，到传粉后，在生长的花粉管中才进行第二次分裂，形成两个雄配子。所以，成熟花粉是两细胞花粉。 另一些植物中，生殖细胞在花粉成熟的过程中就分裂为两个雄配子。所以，成熟花粉粒具有三个细胞。 四、雄核发育 雄核发育的概念：精子与遗传失活的卵子结合，发育成只有父本染色体的个体的一种特殊生殖方式，也叫孤雄生殖。植物单独的雄配子在一定条件下，可以经过细胞分裂发育成胚的现象，也称为雄核发育。 花粉离体培养时，雄核发育最适宜的时期一般是第一次有分裂或之前。 雄核发育途径 A途径：小孢子第一次有丝分裂为不均等分裂，形成营养细胞和生殖细胞 A-V途径：由营养细胞重复分裂形成单倍体； A-G途径：由生殖细胞重复分裂形成单倍体； A-VG途径（E途径）：由营养细胞和生殖细胞各自独立分裂，共同形成单倍体； C途径：营养细胞和生殖细胞通过核融合，形成多倍体植株。 雄核发育途径示意图 B途径：小孢子第一次有丝分裂为均等分裂，形成大小相近的两个细胞。然后由这两细胞连续分裂形成单倍体植株，或者核融合形成多倍体植株。 愈伤组织发育途径举例 六、花药和花粉培养方法 1. 花药培养 取材：镜检，根据花粉的发育时期，选取大小适宜的花蕾。 消毒：70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％次氯酸钠溶液中浸泡10-20min，或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min，无菌水冲洗3-5次。 培养：固体或液体培养基均可。先进行脱分化培养，至小孢子大量分裂形成胚或愈伤，并突破花药壁表面，形成突出物（2-3周）；后转入分化培养基培养，形成小植株。 2. 花粉培养 花粉的分离与纯化 自然散落法（漂浮培养散落小孢子收集法）：将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 挤压法：在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。 机械游离： 磁搅拌法：用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离； 超速旋切法：通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。 小孢子纯化：对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子。 花粉培养方式 平板培养：花粉置于琼脂固化培养基上培养。 液体培养：花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。 双层培养：花粉置固体-液体双层培养基上培养。培养基制作方法：先铺一层琼脂固体培养基，凝固后，在表面加入少量液体培养基。 看护培养：利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 微室