双锌配合物ZnzDTPBC14水解DNA-无机化学学报.PDFVIP

维普资讯 第 11期 无 机 化 学 学 报 VO1．18．NO．1l 2002年 11月 CHINESEJOURNALOFINORGANIC CHEMISTRY NOV．．2002 双锌配合物 Znz(DTPB)C14水解 DNA 余四旺t 刘长林 李东风 。廖展如 徐辉碧 (华中科技大学化学系，武汉 430074) (华中师范大学化学系，武汉 430070) 本工作用光谱表征 、电泳分离及 高效液相色谱 (HPLC)等方法考察 了双锌配合物 Zn(DTPB)C1(DTPB=1，1．4，7，7一五 (2， 苯并咪唑 ．2．基甲基)三氮杂庚烷)与 DNA的结合及其导致 的DNA水解断裂作用 。结果表明 Zn：(DTPB)C1。是 DNA水解的有效 促进剂，以超螺旋 DNA作为水解底物，其消失的反应符合准一级速率定律，初步估算其速率常数为 2．4×10 S～。在低离子强 度的中性或弱酸性缓冲溶液 中，显示 出最佳 的DNA水解断裂活性 ，断裂产物可用于进一步 的酶学操作和末端标记实验。 关键词 双锌配合物 DNA 水解断裂 分类号 0627．23 0621．25 65 金属配合物在生理条件下由水解或氧化途径特 l 实验部分 异断裂 DNA和 RNA在生物无机化学 中一直是深受 1．1 试剂和仪器 重视的研究领域之一_】·。虽然不少金属配合物 已成 小牛胸腺 DNA(CTDNA)、溴 乙锭和质粒 pBR 功地用于促进 RNA(带有高效内亲核试剂 2．OH)水 322DNA分别来源于Sigma和华美公司，CTDNA按 解，但可用于促进高稳定性双链 DNA快速水解的配 标准方法 【】州纯化，质粒 DNA含有一定量的单链断 合物则仍相当有限 】【一l。与 DNA氧化断裂相 比，水 裂 (切 口)的成分，但不影响使用 。DNA碱基对浓度 解断裂的优点是其产物可用于进一步的酶学操作和 由在 260nm处的吸光度测定…】。 [y_32P]．ATP购 自 末端标记 8【】。因此，能快速催化 DNA水解的金属配 北京亚 飞公司，5．DNA末端标记试剂盒 、DNA酶 合物不仅可用于阐明水解酶 中金属离子的功能，而 I、T4DNA连接酶 、HindIIIDNA及 pGEMDNA分 且在分子生物学及生物技术 中具有重要 的应用前 子量参照物和限制性 内切酶 EcoRI、EcoRV、PstI、 景。 PuvII及 HindIII购 自Promega公司。双锌配合物 尽管单核金属配合物通过活化磷酸二酯键水解 Zn：(DTPB)Cl根据文献 ¨提供的方法合成。所有其 DNAt一．，然而 目前研究的主要兴趣集 中在设计具有 它试剂均为分析纯或优级纯，所有溶液均用二次去 序列特异性的由双核金属配合物组成的高效水解体 离子水配制。HPLC实验在