成纤维细胞和ES细胞在小鼠和兔去核卵母细胞内发育.pdfVIP

第46卷第2期 大连理工大学学报 V01．46．H0．2 2OO 0 0 6年3月 ofDaljan of Mar．26 Journal Univers“yTechnology 成纤维细胞和Es细胞在小鼠和兔去核卵母细胞内发育 王 郑瑞珍2， 王笑虹3， 廉 莉4， 雷 刘忠华4， 安利佳1， 陈大元4 (1大连理工大学生物工程系，辽宁大连116024； 2．中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学开放实验室，北京 1。0080 3．大连大学医学院干细胞研究中心，辽宁大连116622； 4．中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室，北京 100080) 摘要：以昆明白小鼠成纤维细胞和胚胎干(Es)细胞作为供棱细胞，以昆明白小鼠和日本犬 耳白兔的MlI期去棱卵母细胞作为受体，采用核移植方法，构建了克隆肛胎．在同种克隆中， 以Es细胞为供棱细胞的克隆胚胎卵裂事明显低于以成纤维细胞为供棱细胞的克隆胚胎卵裂 率(24．4％相对于56．9％，尸o．05)．1．8％的Es细胞克隆胚胎发育到囊胚阶段，而成纤维 细胞克隆胚胎没能发育到囊胚阶段；在异种克隆中，以ES细胞为供棱细胞的克隆胚胎卵裂率 (89．6％)和囊胚发育率(18．8％)明显高于肚成纤维细胞为供棱细胞的克隆胚胎卵裂率 (54．2％)和囊胚发育率(4．2％)． 关键词：胚胎干细胞；成纤维细胞；核移植；胚胎发育 中图分类号：Q78 文献标识码：A O 引 言 (ES)细胞作为供核细胞，分别以昆明白小鼠去核 卵母细胞和日本大耳白兔去核卵母细胞为受体， 目前，虽然许多动物被克隆成功，但是存在的 构建同种和异种克隆胚胎，进而评价不同供体细 主要问题是成活率低，同种动物克隆的成功率只 胞以及不同遗传背景的受体卵母细胞对克隆胚胎 有1％～5％口]，异种动物克隆更加困难o]．影响 的影响． 动物克隆胚胎发育的因素很多，包括克隆技术本 身的因素，如受体卵母细胞的去核、核移植，供体 1 材料与方法 细胞与受体卵母细胞的融合等．研究较多的是供 1．1材料与试剂 核细胞对克隆胚胎发育的影响，如供核细胞遗传 1．1．1 实验动物 昆明白小鼠由中国科学院遗 背景方面o]：来源于同一种系的不同个体的细胞 传与发育生物学研究所动物中心饲养．日本大耳 在同一种卵母细胞内的发育情况不同；供核细胞 白兔由中国科学院动物研究所饲养． 类型方面“]：虽然同一品系不同类型供核细胞基 1．1．2 细胞系 BRL细胞由英国剑桥大学Dr 因组相同，但是也影响克隆胚胎的发育；另外供核 细胞的体外培养代数、细胞周期等也是影响克隆 Evans馈赠． 胚胎发育的因素．系统地探讨不同供核细胞在不