用于检测细胞内谷胱甘肽的比率型荧光探针.PDF

Vol.37 高等 学校 化 学 学报 No.4 2016年4 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 643~647 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 用于检测细胞内谷胱甘肽的比率型荧光探针 杨润洁,唐摇 尧,朱维平 (华东理工大学药学院,上海市化学生物学重点实验室,上海200237) 摘要摇 设计合成了1种用于检测生物巯基的比率型荧光探针(4),并考察了其对谷胱甘肽的识别作用. 在 4鄄羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液中,探针4可与谷胱甘肽快速反应,溶液颜色由淡黄色变为粉红色,从 -5 -4 而实现“裸眼冶检测,且在608nm处的荧光信号增强. 在1郾6伊10 ~2伊10 mol/ L范围内,探针4能够定量检 -7 测谷胱甘肽,检出限为8.9伊10 mol/ L. 此外,探针4还可用于MCF鄄7细胞中谷胱甘肽的成像. 关键词摇 荧光探针;谷胱甘肽;细胞成像 中图分类号摇 O657;O625.75摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A [1,2] 谷胱甘肽、半胱氨酸和高半胱氨酸都属于内源性生物巯基,能够维持细胞内的氧化还原平衡 . 其中,谷胱甘肽是细胞内含量最丰富(0郾5~10 mmol/ L) 的一类巯基化合物,它是由谷氨酸、甘氨酸以 [3] [4] 及半胱氨酸组成的三肽 ,对过氧化氢等氧自由基、汞和铅等重金属有解毒作用 . 细胞内的半胱氨 [5,6] 酸浓度为50~200 滋mol/ L,浓度远低于谷胱甘肽 . 细胞内的高半胱氨酸含量约为5 ~15 滋mol/ L, [7] [8,9] 它是半胱甘酸的前体,经过甲硫氨酸和丝氨酸合成胱硫醚中间体,进而转变成半胱氨酸 . 研究 表明,多种疾病都与细胞内谷胱甘肽含量的异常相关,如癌症、心血管疾病和艾滋病等. 因此,定量检 测细胞内谷胱甘肽对疾病的诊断及治疗具有重要的意义. 与其它方法相比,荧光分析法具有操作简 便、灵敏度高及能够可视化观察等优点,能将微观上分子识别过程转化为宏观上荧光信号的变化,从 [10] [11~14] 而实现对靶标的检测 . 近年来,已有大量用于检测生物巯基的荧光探针被研究报道 . 本文以2,4鄄二硝基苯磺酸酯(DNBS)为受体,三氰基二氢呋喃(DCDHF) 为荧光团[15,16] ,合成了 1种新型的可用于检测细胞内含量最多的生物巯基谷胱甘肽的荧光探针(4). 其中,2,4鄄二硝基苯磺酸 酯是经典的受体,它能够快速识别生物硫醇. 近年来,大量文献[17~19]报道了以DNBS为受体的生物巯 基探针. 与这些探针相比,探针4具有合成简便、能够实现裸眼检测的优点,并且能够对细胞内的谷 胱甘肽进行检测. 由于探针4受体部分的硝基具有吸电子作用,致使磺酸酯基的硫原子带部分正电荷, 在亲核试剂的进攻下磺酸酯键更容易断裂. 因此,当谷胱甘肽中的巯基亲核进攻硫原子时,经分子内 重排、硫氧键断裂,生成游离的酚羟基,使荧光团供电子端电子云密度增加,整个荧光分子推拉电子 体