核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响.pdfVIP

第52 卷 第 1 期 2007 年 1 月 论 文 核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆 胚胎发育的影响 王二耀 于 洋 李雪梅 焦丽红 王 柳 * ( 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室, 北京 100080; 中国科学院研究生院生物系, 北京 100049. * 联系人, E-mail: wangliu@ioz.ac.cn) 摘要 用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆, 成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠. 为探讨不同 核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响, 用 B6D2F1 小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为 供 受体进行核移植实验, 采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植, 并采用电脉冲 乙 醇处理 氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4 种不同方法对重构胚进行活化, 对克隆胚胎的体外及体内发 育进行研究. 结果显示, 利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚 胎的工作效率(49.7%). 乙醇 电脉冲和氯化锶3 种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚, 但前二者处 理的胚胎的囊胚发育率(52.4%, 54.2%)显著低于后者(76.9%). 10 mmol/L 氯化锶处理6 h 活化效果最好. 融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后, 囊胚发育率(9.5%, 8.6%)显著高于单纯电 脉冲激活(2.6%), 而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段. 用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚 的囊胚发育率最高(16.6%). 注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植, 都获得了 发育到期的体细胞克隆小鼠, 发育到期率分别为2.5%和 1.4%. 结果表明, 两种核移植方法对 B6D2F1 小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响, 用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠; 不同活化方法 对重构胚胎的体外发育能力有显著影响, 在上述 4 种激活方式中, 氯化锶处理对克隆胚的激活效果最 好. 关键词 小鼠 体细胞克隆 核移植 显微操作 卵母细胞激活 发育 核移植是研究细胞核重编程的有力工具. 尽管 鼠. 同一实验中采用两种常规核移植方法对相同供 [1~9] 目前已获得多种体细胞克隆动物 , 但克隆效率仍 体细胞体细胞克隆胚胎发育的影响的研究目前还没 然很低. 目前认为导致克隆胚胎 胎儿及克隆动物死 有报道. 亡率高的重要原因之一是克隆技术不够完善, 包括 卵母细胞的激活是影响克隆效率的重要因素, 核移植方法 胚胎激活方式 胚胎培养及胚胎移植等 因为卵母细胞人工活化方式不能完全模仿受精时卵 技术. Perry 报道[7], 从1998 年第一只体细胞克隆小鼠 细胞的活化[12], 因而有必要研究各种激活方法对小 出生以来, 小鼠作为一种优秀的实验动物得到了大 鼠体细胞克隆胚的发育的影响, 筛选最优的活化方 量的应用, 但是小鼠的核移植效率一直很低, 国际上 法, 提高克隆胚胎发育效率. 能够稳定从事小鼠核移植研究的研究组还很少, 这 为了完善克隆技术, 优化小鼠核移植方法和胚 大大限制了核移植研究的深入. 胎激活方式, 本研究使用卵丘细胞作为供体, 比较了 体细胞克隆小鼠最初是使用压电陶瓷(Piezo)辅 两种核移植方法( 电融合方法和直接注射方法)和4 种 助的直接注射方法获得的[2]