灰葡萄孢不同发育表型指纹图谱研究.pdfVIP

沈阳 业大学学报,2016 47(5)：541-547 http ：// Journal of Shenyang Agricultural University DOI:10.3969/j .issn.1000-1700.2016.05.005 严雪瑞 胡梦琼 费诺亚 等. 葡萄孢不同发育表型指纹图谱研究[J]. 沈阳农业大学学报 20 16 47 (5 )：54 1-547. 灰葡萄孢不同发育表型指纹图谱研究 严雪瑞 胡梦琼 费诺亚 石凌波 李 媛 李天来* 沈阳农业大学植物保护学院,沈阳110161) 摘 要 利用ISSR 分子技术 筛选引物用于构建灰葡萄孢(Botrytis cinerea)不同发育表型群体的指纹图谱。 从收集到的300 株 霉菌中选35 株代表菌株 虽然其菌落形态有所差异 但经形态学鉴定、ITS 鉴定、特异引物BC729 鉴定及三基因(G3PDH 、HSP60 和 RPB2 )系统发育树分析均表明其为 葡萄孢种群。 在此前提下 筛选可用于区分不同发育表型的ISSR 引物 引物所扩增的图谱要 求稳定重复 主带明显 带间距宽。经筛选获得3 条引物 名称分别为807、864 和886 其最优退火温度分别为51℃、52℃和49℃。供试 35 个代表菌株经引物807 扩增后出现3 种不同类型指纹图谱 经引物864 扩增后出现4 种不同类型图谱 经引物886 扩增后出现 5 种不同类型图谱。 将以上3 个引物的扩增图谱联合分析 本研究供试菌共出现9 种图谱 合。 9 个图谱类型对应不同的菌落形 态。 灰葡萄孢种下存在高水平分化现象 由于其菌落形态受培养环境影响较大 仅凭形态区分容易造成误差 本研究搭建了一个 葡萄孢种下发育表型的分子鉴定平台 为今后开展菌群鉴定与分析、不同研究条件下菌群比较、演化更替及发掘新菌群提供研究 手段。 关键词 ISSR ；灰葡萄孢；菌群分化；遗传图谱 中图分类号 Q939.5 文献标识码 A 文章编号 1000-1700 (2016)05-054 1-07 Fingerprint of Different Botry tis cinerea Populations YAN Xue-rui, HU Meng-qiong, FEI Nuo-ya, SHI Ling-bo, LI Yuan, LI Tian-lai* (College of Plant Protection, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China ) Abstract ： In this study, inter -simple sequence repeat (ISSR) was applied to construct the genetic fingerprinting of different Botrytis cinerea populations. Although 35 representative isolates were different between each other, they were proved as Botrytis c inerea by ITS, BC729 and three genes (G3PDH , HSP60 and RPB2) phylogenetic tree construction. The primers for ISSR fingerprint were screened. Three different primers, named 807, 864 and 886, were selected with the features of stability, repeatability, obvious main bands. The o