第五课 Tris-EDTA-SDS.docxVIP

缓冲液? 缓冲溶液（英文：buffer?solution）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低pH变动的溶液。pH缓冲系统对维持生物的正常pH值和正常生理环境起到重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。? 在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。? 在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到研究工作的成效。如果“提取酶”实验体系的pH值变动或大幅度变动，酶活性就会下降甚至完全丧失。所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。??? 常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。?? 硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。?? 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。?? 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。?? 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris缓冲液，4℃时是8.4，37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。在pH7.5以下，其缓冲能力极为不理想。?? 缓冲溶液组成???缓冲体系由?? 1、弱酸和它的盐（如HAcNaAc）???? 2、弱碱和它的盐（NH3.H2ONH4Cl）?? ?3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4Na2HPO4）?? ?的水溶液组成。?? 决定缓冲液pH值的因素? 设缓冲系统的弱酸的电离常数为Ka（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：????[H+]?=?Ka?{[弱酸]/[共轭碱]}?? ??pH?=?pKa?+?lg?{[共轭碱]/[弱酸]}????这就是Henderson-Hasselbach?等式。????如果[弱酸]?=?[共轭碱]，????pH?=?pKa? ??根据此式可得出下列几点结论：?? ??1?缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸的pKa值衡定，但酸和盐的比例不同时，就会得到不同的pH值。酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。?? ??2?酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不变。?? ??3?酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为PK±1pH。??缓冲溶液的配制? ??只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。?? ??经查表知pH5.8浓度为0.2M?Na2HPO48.0毫升，而0.2M?Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M?Na2HPO48.0毫升，而0.1M?Na2HPO4需要92.0毫升。?? ??计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。?? ??各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。 Tris 中文品名：?三羟甲基氨基甲烷；?氨基丁三醇；?缓血酸胺? 英文品名：?Tris；?Tris(Hydroxymethyl)aminomethane? 英文别名：?2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol????THAM；?Tris?base；?Trometamol???通用 ?产品纯度：?100%(USP药典级)?/?99.9%(实验室技术级)?? 分?子?式：?NH2C(CH2OH)3???? 分?子?量：?121.14