生物大分子仪器分析方法.docVIP

仪器分析法的特点： （1）、仪器分析法一般都有较强的检测能力。 方法的绝对检出限可达： 微克数量级（10_6g） 纳克数量级（10_9g） 皮克数量级（10_12g） 飞克数量级（10_15g） 方法的相对检出限可达： 微克数量级每毫升（μg?ml－1） 纳克每毫升（ ng?ml－1 ） 皮克每毫升（ pg?ml－1 ） 适于痕量组分（0.1%）的测定 化学分析法只适于常量组分（1%）及微量组分（0.01% ~ 1%）的分析 2）、仪器分析的取样量一般较少。 固体：从 几mg ～ 几μg 液体：从几 μl ～几 nl 可用于微量分析（0.1~10mg 或0.01~1ml ）、超微量分析（0.1mg 或 0.01ml） 化学分析方法取样量较大，可用于常量分析（0.1g 或10ml）和半微量分析 （0.01g~0.1g 或 1~10ml） （3）、仪器分析法具有很高的分析效率。 如：流动注射AAS 120个样品/h，光电直读光谱仪 20个元素/min 化学分析法分析效率较低一般为数min ～数h，只能分析1~2个样品。 4）、仪器分析具有更广泛的用途，不但可用于成分分析，而且也可用于价态分析、状态分析、结构分析、无损分析、表面分析 化学分析只能用于离线的成分分析。 （5）、仪器分析法的准确度一般不如化学分析法。 化学分析法的相对误差0.2%; 仪器分析法的相对误差一般为1％～5％，甚至达到10%。 （6）、仪器分析的仪器一般比较复杂；而化学分析所用设备比较简单。 仪器分析的主要性能指标： 精密度 准确度 灵敏度 检出限 标准曲线及其线性范围 定量校准 精密度：是指在规定的条件下同一样品平行分析结果相互之间的接近程度。精密度一般用标准差和相对标准差（CV）表示。 精密度有不同的表现方式，即重现性、重复性、中间精密度。 重现性：是指在不同实验室，不同检测人员测定结果的精密度。中间精密度：是指在同一实验室中，不同时间由不同检测人员在不同检测设备上测定结果的精密度。重复性：是指在相同条件下，由一个分析人员重复测定所得结果计算出的精密度。 准确度：是指用该方法平行测定所得的均数与样品真实值或参考值的吻合程度，一般用百分回收率表示。准确度是分析过程中系统误差和随机误差的综合反映，它决定着分析结果的可靠程度，方法有较好的精密度且消除了系统误差后，才有好的准确度。 灵敏度：物质单位浓度或单位质量的变化引起响应信号值变化的程度，用S表示。 选择性：表示共存组分对待测组分分析的影响程度。共存组分影响愈小，方法对分析组分的选择性愈高。 检出限：某一方法在给定的条件下能够检出被测物质的最小质量或最小浓度，称为这种方法对该物质的检出限。以浓度表示的叫相对检出限，以质量表示的叫绝对检出限。 方法的灵敏度越高，精密度越好，检出限就越低。检出限是方法的灵敏度和精密度的综合指标，它是评价仪器性能及分析方法的主要技术指标。 线性范围：是指在能够达到规定的精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的最高到最低限待测物质浓度或量的区间。 应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度的结果和要求来确定线性范围。 仪器定量校准方法： 内标法和外标法 内标法：标准物质和被测定物质不是同一物质 外标法：标准物质与被测定物质是同一物质 仪器分析的样品预处理： 一、目的 使样品的状态和浓度适应所选择的分析技术 二、原则 防止待测组分的损失； 避免引入干扰 三、依据 物质性质（生物样品的有机分子或元素等） 干扰情况（是否需要分离等） 测定方法（是否需要富集等） 四、步骤 样品的采集与制备 样品的提取与消解 样品的纯化与浓缩 样品的衍生化 一、明确目标 样品的来源：发酵液、成品、三废 杂质（干扰物质）：结构类似物、降解产物 样品形式：固体、液体、气体、混合物 样品中待测物质的浓度：灵敏度、浓度变化范围 对分析结果的要求：稳定性、准确度、精确度等 样品分析的通量要求：操作时间要求 成本要求 二、收集信息（查阅文献）： 待测物质的理化性质 可能存在杂质的理化性质 待测物质的标准/通用测定方法及其适用范围 可选方法的理论基础 阅读仪器的使用说明书 三、预实验方案 实验方案包括的内容：目的和意义、实验原理、实验方案、所需资源、日程安排、实验预期结果、参考文献 预实验方案考察的因子：专一性、灵敏度、定量限、线性范围（初步）、操作通量 四、实验操作 实验操作的描述再怎么细致也不过分； 实验操作过程前要注意操作条件的验证和确认；如：摇床温度30℃ 实验操作要具有可重复性，不仅仅是自己可以在一定的误差范围内重复实验结果，同时其他人按照实验操作进行，可以得到同样的实验结果； 在实验操作上，细节决定成败