CIK细凹胞免疫治疗.ppt

我国肿瘤现状 ?癌症对人类健康和生命的威胁很大，它和心血管疾患已成为医学上的两大难关，在全世界构成死亡原因的头两位。全世界52亿人口中，每年约有700万人新患癌症，每年约有500多万人死于癌症， 几乎每6秒钟就有一名癌症患者死亡。　　我国目前每年平均约有150万人新患癌症，每年约有80万人死于癌症，其中肺癌、胰腺癌、肝癌、鼻咽癌、前列腺癌、恶性淋巴瘤等，近年来有上升的趋势，由于防癌措施的普及，宫颈癌、睾丸癌症、白血病等有下降的趋势。 《我国恶性肿瘤发病现状及趋势》 中国肿瘤，2012.2 生物治疗的原理 免疫系统是人体的防御体系，一方面发挥着清除细菌、病毒、外来异物的功能，另一方面消除体内衰老细胞以及发生突变的细胞(有的突变细胞会变成癌细胞)。机体免疫系统和癌细胞相互作用的结果决定了癌症的最终演变。对于健康的人来说，其免疫系统的强大足以及时清除突变的癌细胞。但对于癌细胞病人来说，普遍存在免疫系统低下，不能有效地识别、杀灭癌症细胞；另一方面，癌症细胞大量增殖，会进一步抑患者的免疫功能，而且，癌症细胞有多种机制来逃脱免疫细胞的识别与杀伤，癌症的免疫治疗就是借助分子生物学技术和细胞工程技术，提高癌症的免疫原性，给机体补充足够数量的功能正常的免疫细胞和相关分子，激发和增强机体抗瘤免疫应答，提高癌症对机体抗癌症免疫效应的敏感性，在体内、外诱导癌症特异性和非特异味性效应细胞和分子，达到最终清除癌症的目的。 细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK） CIK细胞是将人体外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，又被称为NK细胞样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤优点。 CIK细胞中的效应细胞是CD3+和CD56+细胞，在正常人外周血中极其罕见，仅1%—5%。 在体外经多因子培养2到3周，CD3+CD56+细胞迅速增多，较培养前升幅可达1000倍以上。 CIK细胞治疗属于过继细胞免疫疗法，由于CIK细胞溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受肿瘤组织类型的限制，因此对任何一种肿瘤均有杀伤作用，但对高抗原表达的癌症疗效最好。 CIK细胞治疗适应症 Karnofsky（卡氏，KPS，百分法）功能状态评分标准 CIK细胞治疗禁忌症 自身免疫性疾病患者 T细胞淋巴瘤患者 对治疗中所用生物制剂过敏者 怀孕或哺乳期妇女 器官功能衰竭及脏器移植者 不可控制的感染性疾病 细胞治疗示意图 CIK细胞的体外来源 病人采血前注意事项 仪器：超净台或生物安全柜，离心机、水浴锅、微波炉、天平、移液枪、显微镜 准备材料：剪刀、镊子、培养瓶，离心管/~架，5ml/10ml/25ml移液管，滴管 试剂：CIK培养基，生理盐水，硫酸庆大霉素，各种细胞因子等 消毒用品：75%酒精，无菌纱布，酒精棉球 分离PBMNC CIK细胞培养流程 CIK细胞回输时的一些准备工作 回输前的准备： 医生填写治疗申请单，病人或家属签字知情同意书 护士核对科室、病人姓名、住院号、床号、血型等 回输时的注意事项： 用输血器回输，前15min缓慢滴注（20~30滴/分钟），无反应后按60滴/min滴入，回输过程中观察患者有无其他反应 回输后的注意事项： 回输结束后，应留院观察2h左右 CIK细胞治疗的副反应及处理 常见的副反应： 一过性发热，常在输入后4-8h内发生，持续2- 8h； 其它的副反应：乏力和全身不适等，较少见；出现寒战可肌注25mg异丙嗪。 发热的处理： 体温38℃，无需特殊处理，嘱患者多饮水即可，会自行缓解 体温38.5℃，温水擦浴，必要时肌肉注射20mg苯海拉明或12.5mg非那根； 回输的穿刺点如有红肿、疼痛、皮温升高、硬结予以50%Mg2SO4湿敷即可。 人体外周血单核细胞分离（SOP） 操作步骤： 50 ml离心管中加入15 ml淋巴细胞分离液； 用吸管吸取血样沿管壁缓慢加于淋巴细胞分离液液面上，注意此过程中不能把血液与分离液间的界面破坏，保持界面的清晰； 配平后，于2000 rpm离心20 min； 离心结束后，管内液体分四层，从上到下分别为血浆、单核细胞、分离液和红细胞，缓慢吸取上层血浆，置于离心管内于56 ℃灭活30 min后，于3000 rpm离心10 min，4 ℃保存备用 将滴管插到云雾层，吸取单核细胞至另一个离心管中，加入1#试剂50ml，于1500 rpm离心10 min； 倾出上清液，再用1#试剂50 ml重悬细胞，洗涤2~3次； 计数细胞总数和测定细胞活力，备用； 最后将清洗干净的单核细胞转入隔天已包被好的细胞培养瓶中培养。 注意事项： 整个过程要严格无菌操作； 将血加入淋巴细胞分离液时，必须保持两种液体界面清晰； 用滴管吸取淋巴细胞层时，要掌握好力度，在细