干旱胁迫诱导水稻产生可遗传表观遗传变异及其相关生理代谢变化的研究.pdfVIP

摘 要 胞嘧啶DNA甲基化对植物的基因表达、基因组防御以及生长发育等许多细胞基本 活动过程具有重要调控作用。已有研究表明环境胁迫经常伴随着植物基因组DNA甲基化 水平和模式的改变。本研究采用15%PEG对水稻（品种松前）胁迫处理4天后，随机提取 14个处理的水稻松前单株叶片DNA，利用甲基化敏感扩增多态性标记（MSAP）技术筛选 出甲基化变异最大的1个单株S0，用甲基化敏感Southern杂交技术和Realtime-PCR技术 对S0代及其随机选取的S1代14个单株的DNA甲基化变异和基因表达进行检测，探讨S0代 和S1代DNA甲基化变异与基因表达之间的相关性，并进一步对S1和S2代（DNA甲基化变异 与基因表达可能具有相关性的S1的后代）生理学特性以及基因表达模式的遗传情况进行 研究，获得的主要结果如下： 1. 干旱胁迫后，亲代（S0）和子代 （S1）CG甲基化均未发生明显改变，S0代CHG甲 基化模式发生了变异，MSAP结果显示S0代CHG超甲基化的变异范围为0-3.8%，CHG去甲基 化的变异范围为0.2-4.2%。 2. Southern杂交结果显示：S0代脯氨酸途径基因的甲基化没有发生变化，S1代脯 氨酸合成的谷氨酸途径关键基因P5CS在后代（14个单株）全部发生了CHG去甲基化变异， 变异率为100%，鸟氨酸途径关键基因δ -OAT在后代中有3个单株发生了去甲基化变异， 变异率为21%， P5CDH 和P5CR基因的甲基化没有明显变异，变异率为0%；Realtime-PCR 结果表明：S1代P5CS基因表达上调率100%，δ -OAT 和P5CR基因S1代14个单株中有10个 单株的表达发生上调，表达上调率为71.4%，降解途径中的关键基因P5CDH S1表达下调 率7.1%，上述结果表明DNA 甲基化变异与基因表达之间可能仅在部分基因上存在一定的 关联性。 3. 甲基化变异后代脯氨酸代谢、氮代谢和离子通道相关基因的表达结果显示，所 有基因的表达均发生了改变，并且基因的表达模式在后代中变化的方向不同，没有表现 整体上调或下调，但是就某一个基因而言，基因在特定器官中的表达具有一定的趋同性。 如GS1基因家族中3个基因型在后代的S2-2中表达量均为上调，后代氮代谢部分基因的表 达的增强暗示对脯氨酸的累积有协同促进作用，而且均有部分后代能够遗传亲代的这些 基因的表达模式。这说明虽然经历再次干旱胁迫，亲代的基因表达模式仍然可以稳定地 遗传给后代。 4.干旱胁迫6h时，后代叶片中仅有S1代游离脯氨酸含量高于control脯氨酸含量， 随着胁迫时间的延长，胁迫4天时，S1和S2-3叶片脯氨酸含量均高于control，S2-3表现 出与S1代一致的生理特性，这表明经过干旱胁迫驯化后，后代的抗旱性可能有所增强。 I 5. 我们检测了亲代和子代阴离子和阳离子的含量的变化，结果表明经历再次干旱 胁迫，后代单株中表现出不同于对照的Na/K 离子平衡和对阴离子尤其是H PO -离子的吸 2 4 收，这种改变与本研究中这些离子的基因表达的变化有一定关系，推测这可能是植物受 到胁迫后的一种适应性应答反应，但也可能是被动变化。 6. 在正常和15%PEG胁迫条件下，S2代表型明显不同，S2-3在胁迫前后植株具有相 同的高度，而S2-1和S2