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讲 座 高 效 液 相 色 谱 讲 座 Ⅴ（酰 硅 胶 色 谱 上（） 张玉奎 邹汉法 李秀珍 卢佩章 （中国科学院大连化学物理研究所） 液—固色谱是发展最早的一种方法。早 在1903年，俄国化学家茨维特已将此法用于 植物叶绿素的分离。其分离原理是基于溶质 与固体吸附剂表面活性中心之间的相互作 用。常用的固定相有硅胶、氧化铝和活性炭 等。硅胶是应用最广泛的一种。由于硅胶的 化学性质稳定，机械强度好，易于加工成不 同形状 无（定型和球型）的颗粒，因而在液 用于色谱分离的硅胶表面嬷主要也是这二 相色谱中所用的吸附型固定相和键合相填料 种活性吸附点。这二种活性点的浓度和性质 的基体中硅胶 占主要地位。本章主要介绍以 取决于制备担体的方法。如把硅胶担体的温 硅胶为代表的液—固吸附高效液相色谱法。 度升到200℃以上时，氢基化的硅羟基脱水 液—固吸附色谱适用于分离中等分子量 生成硅氧烷基，在过量水存在下的硅氧烷基 的样品 （即分子量小于1000的低挥发性样 又可还原为氢基化的硅羟基。游离的硅羟基 品），特别适用于油溶性样品。对某些异构体 只能在400℃以上的温度下发生氢饣基化，继 类型的样品，液—固色谱比其他液相色谱方 而脱水生成硅氧烷基。该过程在大孔硅胶担 法具有较高的选择性。对不同类型的化合物， 体上是可逆的，而在细孔硅胶担体上是不可 即具有不同官能团取代基种类或数目的化合 逆的。经150℃-200 活化的硅胶的表面活 物，液—固色谱也能给予分离。但对某些烷 性点主要是游离的和氢基化的硅羟基及少量 基取代化合物或分子量上差异较大 的化合 的硅氧烷基。一般认为氢基化的硅羟基吸附 物，液—固色谱分离就比较困难。 活性太强，常常引起化学吸附、峰形拖尾以 5-1 硅胶的表面结构和色谱保留行为 及延长柱的再生周期等不 良的色谱效应。为 1．硅胶的表面结构 消除这种效应，常需在硅胶表面上加入极性 为了说明硅胶的保留行为，首先介绍一 改性剂如水等以钝化最强的吸附部位。由于 下硅胶的表面特征。色谱用的硅胶通常是由 硅氧烷基的奈吸附活性很弱，因此对色谱分离 硅酸钠与无机酸 （例如盐酸）反应制备的。 过程中吸附起主要作用的是剩余的游离型硅 聚合的结果形成了三维空间排列的Si04四面 羟基。 体。这种聚硅酸脱水时形成稳定的多孔固 2．硅胶色谱妆保留规律 体。关于硅胶表面结构，一般认为有二种吸 在硅胶色谱中，决定样品分子的相对吸 附活性强度不同的活性点，即如图5-1所示 附作用的首要因素是样品分子官能团。当官 的游离型和氢基化的硅羟腔基。 能团的极性和数目增加时，由于谘样品分子与 极性硅胶表面的总相互作用增加，因此相对 全孔微粒硅胶作为填充担体。这二种固定相 吸附作用也随之增加。在吸附色谱中，保留和 担体都有利于传质和扩散过程的加快。特别 选择性是由样品分子和溶剂分子对硅胶表面 是微粒硅胶，在分析速度和分离效率方面从 上吸附活性点竞争吸附及样品分子上的各种 根本上解决了经典液相色谱法存在的问题。 官能团和吸附表面硅羟基各种相互作用，以 近代高效液相色谱中应用最多的硅胶固 及样品分子与溶剂分子间的液相作用所决定 定相有两种类型，即全孔型和表面多孔型。 的。这意味着硅胶色谱对同系物一般有很小 全孔型吸附剂有球型、无定型 非（球型）和 的选择性，这种选择性有利于族分离。另外 堆积硅珠三种。 液—固色谱在异构体的分离方面一般要比其 一（）全孔型吸附剂 他液相色谱法有更高的选择性。 1．球型硅胶：属于这种类型的国外有 由于流动相分子与硅胶表面之间，流动 Porosil型。共有六个型号。表面积为1.5- 相分子与