微量热法研究单底物酶促反应的产物抑制作用-上海有机化学研究所.PDF

化学学报 ACTA CHIMICA SINICA 1996, 54 , 38-44 微量热法研究单底物酶促反应的产物抑制作用 梁毅* 吴鼎泉 屈松生 汪存信 (武汉大学化学系 武汉 430072) 摘要 本文建立了有产物抑制的单底物酶促反应动力学的对比进度方程和热动力学的数学模型. 根据此模型，可由反应的热谱曲线方便地解析出动力学参数(K ， Ki 和 V) 和摩尔反应烙 m (ÒH ) ，并同时确定产物的抑制类型.用微量热法研究了精氨酸酶催化水解 L 精氨酸的热动力 m 学，确定水解产物 L →鸟氨酸属于竞争性可逆抑制剂，298.15K 和 pH 9.4 时 L 一鸟氨酸与精氨酸 酶作用的抑制常数 Ki = 1. 22 x 10 - 3 l L- 1 mo 实验结果验证了本文有产物抑制的单底物酶促反应 热动力学研究法的正确性. 关键词 微量热法，产物抑制，酶促反应，对比进度法，精氨酸酶 已经证明[口，热动力学对比进度法也可以应用于反应完全、无产物抑制的单底物酶促反应，而 且可以由一次实验的反应热谱曲线同时解析出动力学参数(Km. V m) 以及摩尔反应恰. 在文献[1] 的基础上，本文根据 Michaelis - Mer出n 方程积分式，建立了有产物抑制的单底物 酶促反应动力学的对比进度方程和热动力学的数学模型.依照此模型，可由一次实验的热谱曲线方 便地解析出摩尔反应恰(ð.rHm}. 由两次实验的热谱曲线确定产物对酶是否有抑制并同时解析出动 力学参数(Km.Ki 和 V ). 由三次实验的热谱曲线确定产物的抑制类型.用微量热法研究了精氨酸 m 酶催化 L- 精氨酸水解的产物抑制作用，实验结果验证了本文有产物抑制的单底物酶促反应热动 力学研究法的正确性. 1 理论 1. 1 有产物抑制的单底物酶促反应动力学的对比进度方程 产物对酶促反应的反馈抑制在生物化学中比较常见，而且这种抑制对体内的代谢调节具有重 要意义[2] 根据产物与底物的关系，产物对酶的可逆抑制作用可分为三类一一竞争性抑制、非竞争 性抑制和反竞争性抑制. 对于单底物酶促反应体系，若产物对酶具有竞争性可逆抑制作用，则存在下列平衡关系式: 是 是 k 1 2 3 S+ E ~主 ES 一一.. P + E ~ EP (1) k_ 1 k-3 设底物和酶的初始浓度分别为 So 和 Eo. 产物的初始浓度为零，底物、产物的 t 时浓度分别用 S 、 P 表示，若上述酶促反应进行完全，则该反应在 t 和儿的反应进度分别为: 1994 一 10 - 31 收到 修改稿于 1995 - 02 - 20 收到.国家自然科学基金资助的项目.铸现为武汉大学化学系博士研究 生. 化学学报 ACTA CHIMICA SINICA 1996 39 工 ==P==5。一 S