樱桃带化病组织中植物菌原体16SrDNAPCR扩增及-林业科学研究.PDF

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2018-08-17 发布于天津
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樱桃带化病组织中植物菌原体16SrDNAPCR扩增及-林业科学研究

1997, 10( 5) : 478481 Forest R esearch 樱桃带化病组织中植物菌原体 16 S rDNA PCR * 扩增及其产物RFLP 分析李横虹　邱并生　史春霖　金开璇　周　琦　黄习军 ( phyt oplasma) DNA , 16 S rDNA , , ( RFLP) RFLP , L , I. M . , , PCRRFLP 1995 , 1 ( P runus av ium L. ) 6 3 500 , , ( 1) , , , 45 cm , [ 1] , , 3% , 1 1　材料和方法 1. 1 1. 2DNA [ 2] Harrison N . A. CT AB, , ( ) , , ( 100080) ; ( ) ; , ( ) *, , , , , 5 : 16 S rDNA P CR RFLP 479 DNA , - 20 : : 2. 05 g NaCl, 0. 05 g , 0. 5 , 20 , 1 0. 5 / ( 8. 0) , 2. 5 / g CTAB mL mL mol L EDT A pH mL l mol L T ris Cl( pH8. 0) , 25 mL , 0. 3 g , 0. 9 mL , 60 30 min, 5 000 rpm 5 min, , ( 241) , 10 000 90 , 2/ 3 - 20 30 , 10 000 5 , rpm s min rpm min 1 mL 70% , 100 L TE, Shimadzu UV 2201 OD260, DNA 1. 3PCR 1) , . . , 16 , 16 2/ L I M S rDNA R mF R 16mR 1 , R16F2/ R16R2 , PCR( n st d-PCR) : 16 2= 5- -3 16 2= 5- -3 R mF CAT GCAA GT CGAACGGA R F A CGA CT GCT AAGA CT GG 16 1= 5- -3 16 2= 5- -3 R mR CT TAA CCCCAAT CAT CGA C R R GCGGT GT GTA CAAA CCCCG PCR : 50 L PCR 500 nmol/ L, dNTP 100 mol/ L, DNA