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3.1 菊花的组织培养 习题 2 目标导航 1.了解植物组织培养技术在生产中的应用和MS固体培养基的配方.2.熟悉植物组织培养的基本过程和影响植物组织培养的因素.3.理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化. 知识清单 一、基础知识 1．植物组织培养的基本过程 (1)细胞全能性的表达：________的植物组织或细胞，在一定的____________、________和________________的作用下，发育成完整植株的过程. (2)细胞分化：在植物的________过程中，细胞在________、________和____________上都会出现________的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化. (3)植物组织培养的基本过程 离体的植物器官、组织或细胞(又叫________)愈伤组织胚状体、丛芽等新个体 ①愈伤组织的特点：细胞________________，是一群________________的呈________________的薄壁细胞. ②脱分化(去分化)：由____________的植物组织或细胞产生____________的过程. ③再分化：由________________________重新分化成根或芽等器官的过程. (4)条件：________的植物组织或细胞，在一定的________、________和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株.离体的植物组织或细胞叫做________. 2．影响植物组织培养的因素 (1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度____________.对于同一种植物材料，材料的________、________________等也会影响实验结果.因此菊花的组织培养，一般选择________________的茎________部________的侧枝. (2)营养物质的影响：常用的________培养基，主要成分包括____________、____________、________以及蔗糖等.其中____________和____________提供植物细胞所必需的无机盐；________提供碳源，维持细胞渗透压. (3)植物激素的影响：MS培养基常需添加植物激素.其中________和____________是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的________、________________以及____________等，都会影响实验结果. 下表是关于两种植物激素在组织培养过程中的作用. 使用顺序或用量比 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于__________，但细胞________ 先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞____________ 同时使用 分化频率____ 生长素用量/细胞分裂素用量，比值高 有利于____的分化、抑制____的形成[ 生长素用量/细胞分裂素用量，比值低 有利于____的分化、抑制____的形成 生长素用量/细胞分裂素用量，比值适中 促进________的形成 (4)环境因素的影响：________、________、________等条件也能影响植物组织培养. 二、植物组织培养的操作流程 1．制备MS固体培养基：将各种营养成分按比例配制成________________.利用母液配制菊花组织培养所需要的培养基，菊花的组织培养比较容易，因此可以不加激素，而如果是其他植物的组织培养，则要配制成三种培养基，即____________、________________和________________.配制菊花的组织培养的培养基时先将称好的琼脂加入800 mL 蒸馏水中，加热使________熔化；然后加入______________30 g，加入一定量的________，充分混匀后加蒸馏水定容至1 000 mL，调节________；最后分装到锥形瓶中，每瓶分装50 mL或100 mL.用包在纱布中的棉塞封严瓶口，外面包一层牛皮纸.将配制好的培养基放入________________锅，在121℃下灭菌15 min. 2．外植物体消毒：选取生长旺盛的菊花的嫩枝，先用清水洗净，再用体积分数为________________浸泡6～7 s后，立即取出并用无菌水清洗，取出后吸干水分再放入质量分数为________________中浸泡 1～2 min.取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液. 3．接种：在超净工作台上铺上无菌滤纸，将已消毒的菊花茎段切成小段(长0.5～1.0 cm)，迅速接种到培养基上.插入时应注意方向，使嫩茎的形态学下端接触培养基，不要________.每瓶接种6～8块嫩茎.接种后，将锥形瓶的瓶口在酒精灯火焰上转动灼烧一遍，将封口膜