响应面法优化鲅鱼抗氧化肽发酵条件.pdf

第43卷第2期 渔 业 现 代 化 Vo1．43 No．2 2016年4月 FISHERY MODERNIZATION Apr．2016 DOI：10．3969／j．issn．1007-9580．2016．02．011 响应面法优化鲅鱼抗氧化肽发酵条件 艾冰花 ，艾丽花 ，陈 琳 ，李秉钧 ，冯俊荣 ，韩龚文 (1烟台大学海洋学院，山东 烟台264005； 2烟台大学生命科学学院，山东 烟台264005； 3龙 口市水产技术推广站，山东 龙12I265700) 摘要 ：为减少加工废弃物蛋 白所造成的环境污染，提 高水产品的利用率，探 索 了回收利用鲅鱼 (Spanish mackere1)加工后富含蛋 白质的废弃物，以寻找制备鲅鱼抗氧化肽的最佳生产条件。借助 Design—Expea数据 处理软件对苏云金 芽孢杆菌Hy-4发酵产抗氧化肽的条件进行优化；在单因素试验的基础上，利用Plackett— Burman试验设计法对影响发酵制备鲅鱼抗氧化肽的培养条件进行筛选。确定了影响发酵液总抗氧化活性的 3个主要影响因素(P0．5)为发酵温度、培养基初始pH和料液比；在此基础上，利用最陡爬坡实验逼近3个关 键因素的最大响应区域，再利用Box—Behnken试验设计及响应面分析法进行回归分析，通过求解回归方程得到 产抗氧化肽的最优条件为：发酵时间48h，发酵温度30℃，培养基初始pH6．8，接种量2％，料液比1．45 50mL，茵龄24h。经过验证，发酵液总抗氧化活性达到537．73U，较优化前提高了57．2％，与回归方程的预测 值 570．11u相 比，相对误差为5．7％，说明模型能够较好地预测菌株Hy-4发酵产抗氧化肽发酵液的总抗氧化性。 关键词 ：鲅鱼 ；抗氧化肽 ；发酵；响应面法 ；总抗氧化活性 中图分类号：Q933 文献标志码：A 文章编号：1007-9580(2016)02-056-06 鲅鱼 (Spanishmackere1)加工废弃物富含蛋 的边角料 (不含鱼头、鳍和 内脏)；苏云金芽孢杆 白质，采用微生物发酵的方法对其加以利用、制备 菌Hy-4取 自本实验室；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、 抗氧化肽，可以提高蛋 白质的利用率，减少环境污 氯化钠、盐酸、氢氧化钠等均为分析纯，购于天津 染_l 。多种优化方法 已广泛应用于微生物发 市致远化学试剂有限公司；总抗氧化能力 (T— 酵，其中以响应面法的效果最为显著 J，其特点 AOC)测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。 是可以从众多变量中快速筛选出主要影响因素， 仪器与设备：LDZM-40KCS型立式压力蒸汽 避免非重要因素造成时间和资源上 的浪费_4j。 灭菌器(上海 申安医疗器械厂)；250HG型数显光 本研究前期已经筛选出一株具有一定酶解鲅鱼蛋 照振荡培养箱 (金坛市精达仪器制造厂)；H1650． 白酶活力的苏云金芽孢杆菌Hy4，并且发现发酵 W型台式高速离心机 (湖南湘仪实验室仪器开发 液中主要是多肽类物质表现出总抗氧化活性 。本 有限公司)；V一1100D型可见分光光度计 (上海美 试验 以发酵液经离心过滤制得的抗氧化多肽溶液 谱达仪器有限公司)。 的粗品为研究对象，采用响应面法，接种苏云金芽 1．2 试验方法 孢杆菌Hy-4进行发酵，以寻找优化产抗氧化肽的 1．2．1 原料处理及发酵液制备 发酵条件 ，由此提高生产效率，降低生产成本。 处理方法根据相关文献 并稍作修改。 (1)原料处理：原料绞碎一烘干(70℃