以甘油为底物利用重组大肠杆菌生产聚羟基丙酸.pdf

微生物学通报 Oct. 20, 2014, 41(10): 1961−1968 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.140015 研究报告 以甘油为底物利用重组大肠杆菌生产聚3-羟基丙酸 1,2 2 2 2* 1* 杨鹏 王琦 咸漠 赵广 薛永常 (1. 116034) (2. 266101) 摘 要【目的】解决前期研究中所构建的以甘油为底物合成聚3-羟基丙酸(P3HP)的代谢途径 中存在两个主要的问题——细胞内还原力不平衡和质粒丢失，以提高P3HP 的产量。【方法】克 隆来源于肺炎克雷伯氏菌的1,3-丙二醇(1,3-PDO)氧化还原酶基因，构建P3HP 和 1,3-PDO 联产 的菌株，解决细胞内还原力不平衡的问题。利用自杀性载体系统介导的同源重组技术，将甘油 脱水酶及其激活因子的基因整合到大肠杆菌基因组中，提高质粒的稳定性。同时，对发酵条件 进行优化。【结果】菌种改造和发酵条件优化显著提高了P3HP 产量，在摇瓶条件下到达2.7 g/L ， 比以前的报道提高2 倍，并可同时得到 2.4 g/L 1,3-PDO 。【结论】该重组大肠杆菌合成P3HP 的产量得到提高，具有较好的工业化生产前景。 关键词聚3-羟基丙酸，自杀质粒，同源重组，基因工程，重组大肠杆菌 The production of poly(3-hydroxypropionate) by recombinant Escherichia coli from glycerol YANG Peng1,2 WANG Qi2 XIAN Mo2 ZHAO Guang2* XUE Yong-Chang 1* (1. School of Biological Engineering, Dalian Polytechnic University , Dalian , Liaoning 116034, China) (2. CAS Key Laboratory of Bio-based Materials, Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology, Chinese Academy of Sciences , Qingdao, Shandong 266101, China) Abstract: [Objective] In previous study, we constructed a metabolic pathway to synthesize poly(3-hydroxypropionate) (P3HP) from glycerol. But two main issues, the reducibility imbalance and plasmid loss, still remained. In order to increase the yield of P3HP, we must solve those prob- lems. [Methods] The 1,3-propanediol (1,3-PDO) dehydrogenase gene was cl