端粒和端粒酶与肿瘤的发展概况.docxVIP

端粒和端粒酶与肿瘤 发生的研究进展学 院 ：生命科学学院专 业 ：生物工程姓 名 ：指导老师：关键词? 端粒酶;端粒酶抑制剂;肿瘤治疗?在诸多探索中，肿瘤细胞永生化的“端粒端粒酶学说”已为越来越多的研究结果所证实。已有的研究表明，80%～90%的恶性肿瘤中均有端粒酶的活性表达，而大多数体细胞无端粒酶的活性，由此可见端粒酶的激活在细胞永生化及肿瘤的形成中具有十分重要的作用。近年来端粒酶抑制剂的研究和开发为肿瘤治疗提供了新的思路，并有可能成为肿瘤治疗的突破。本文中对近年来端粒酶的最新研究进展，特别是有关端粒酶抑制剂以及在肿瘤等疾病治疗中的应用前景，进行综述和分析。1? 端粒与端粒酶的生物学特性端粒是真核细胞染色体末端由重复DNA序列和蛋白质组成的复合物，是保持染色体完整性和稳定性的重要结构。Muller于1938年首次发现这一结构并将其命名为端粒（telomers）。1991年，Blackburn〔1〕描述了真核生物染色体的端粒结构并指出端粒的长度在DNA复制时不断缩短，当端粒的长度缩短到一定程度时，细胞即停止分化而衰老死亡，这使细胞具有一定的分裂寿命。故端粒长度是决定细胞增殖能力和寿命的分子标志。而以上这一过程均由端粒酶进行调控。端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖核酸蛋白酶，可以延长端粒DNA，阻滞因端粒缩短诱发的细胞衰老凋亡。1985年Greider 和Blackburn〔2〕首次从四膜虫细胞提取液合成端粒的实验中，发现了端粒酶活性并同时证实了端粒酶具有维持端粒长度的作用。一般认为端粒酶由端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白（TP1/TP2）和端粒酶催化亚基（hTERT）3部分组成。hTERT是端粒酶的催化亚基，通过逆转录hTR模板序列，合成端粒DNA序列并添加到染色体末端，催化末端的端粒DNA复制和延长。hTR基因在人的组织细胞中广泛表达，而hTERT基因只在端粒酶活性阳性的细胞中（如生殖细胞、各种具有分裂分化能力的组织干细胞和绝大多数的肿瘤细胞）表达。hTERT是控制细胞端粒酶活性的限制性成分。因此端粒与端粒酶的生物活性机制已被认为是细胞分裂、增殖的基础，与细胞的衰老、永生化和肿瘤发生密切相关。2? 端粒、端粒酶与肿瘤的演进近年来随着肿瘤分子生物学的不断发展，越来越多的研究表明绝大部分恶性肿瘤细胞的端粒长度较正常细胞缩短。自1994年，Kim〔3〕开始应用一种灵敏的基于PCR的端粒酶检测方法TRAP法来探测人体组织中的端粒酶活性后，研究发现，90％的恶性肿瘤组织中都存在端粒酶活性，在常见恶性肿瘤细胞中端粒酶活化的阳性检出率分别为：胃癌85％、肺癌80.1％、肝癌85％、乳腺癌85％、肾癌71％、胰腺癌95％等〔4～7〕。由此可见端粒酶基因的异常激活是绝大多数恶性肿瘤发生的共同途径〔8～10〕。端粒酶在恶性肿瘤增殖中的重要性及其高表达率，使之成为恶性肿瘤化疗和基因治疗的重要靶点〔11，12〕。当端粒酶催化亚基基因在转入细胞内既能延长细胞寿命又不影响细胞的正常功能时，延长寿命的细胞就能有效的抑制衰老，如皮肤的老化、肌肉的退缩和动脉硬化等。由此可见，端粒酶与老年人的多发肿瘤疾病也有着密切关系。故通过抑制肿瘤细胞增殖和诱导其衰老凋亡而发挥治疗作用的端粒酶活性抑制剂成为肿瘤基因治疗的重点。3? 端粒酶抑制剂作用机制及治疗肿瘤的研究目前基于对端粒酶结构、功能和调控机制的理解认为抑制端粒酶活性或基因表达的抑制剂，使肿瘤细胞不能有效合成端粒序列，从而发生“凋亡”，达到治愈肿瘤的目的。主要有以下途径：①阻断端粒酶RNA模板作用，抑制端粒酶活性。包括：反义hTR，反义寡核苷酸；肽苷酸；锤头状核酶。②对端粒酶蛋白组分的抑制剂：端粒酶蛋白抗体；PKC调节剂；hTERT抑制剂。③其他抑制剂。3.1? 以端粒酶RNA为靶点 3.1.1? 反义寡核苷酸（ODN）? 端粒酶RNA序列中含有与DNA互补的模板序列，因此可设计能与之结合的ODN来使端粒酶失活，从而阻止端粒序列的合成。Feng〔13〕通过反义hTR转染人Hela细胞发现，癌细胞系中端粒长度的维持可被与人端粒酶RNA互补的反义RNA的表达所阻断，引起细胞危机。Mukai〔14〕等设计出通过ODN结合RNA模板区域以阻断端粒酶活性的方法，将5磷酸化2～5寡腺苷对裸鼠的颅内胶质瘤进行处理，发现恶性胶质瘤细胞的增殖能力降低至43%～76％，与对照组相比显示出明显的治疗效果。Nielsen〔15〕等用多肽骨架替代ODN中核糖磷酸骨架成功地合成了肽核酸，可与DNA或RNA形成稳定的WatsonCrick键，而且由于不带电荷，其中性骨架间无排斥力，同时其分子内部残基间形成氢键，因此化学稳定性好，Tm值高，不易被核酸酶和蛋白酶降解，且合成容易，仅需相当短的DNA序列，有望